產(chǎn)品簡介：

細胞活力/毒性檢測（CCK-8試劑盒），可用于細胞增殖和毒性分析,，方法簡便而準確,。其基本 原理為：該試劑中的 WST-8 與 MTT 類似，在電子載體 1-甲氧基 PMS 的作用下,，被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具 有高度水溶性的橙黃色甲臜染料（Formazan），甲臜的生成量與活細胞的數(shù)量和活力成正比，因此可利用這一特 性直接進行細胞增殖和毒性分析,。

操作步驟：

1,、使用 96 孔板，細胞培養(yǎng)和處理完畢,。

2、每 100μl 細胞培養(yǎng)液加入 CCK-8 試劑 10μl,。

3、培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,，37℃孵育 1~4 小時,。

4,、于 450nm 處測定 OD 值。

5,、結(jié)果分析將各測試孔的 OD 值減去對照孔或調(diào)零孔 OD 值,。各平行孔的 OD 值取平均數(shù)。

細胞活力％=（加藥細胞 OD-空白 OD）/(對照細胞 OD-空白 OD)×100％.

6,、若使用 96 孔外的培養(yǎng)板，試劑用量等比例增減,。

注意事項：

1,、*使用時,，建議先做幾個孔摸索條件，考察接種細胞的數(shù)量和加入 CCK-8 試劑后的培養(yǎng)時間,。

2,、加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應(yīng)時間不同造成的顯色誤差,。有條件的情況下，建 議采用多通道移液器,，可以減少平行孔間的差異,。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差，CCK-8 試劑可在加樣前 用培養(yǎng)基稀釋混勻,。

3、試劑加入后輕輕振搖培養(yǎng)板，使 CCK-8 試劑與培養(yǎng)基充分混勻,。

4,、試劑加入后培養(yǎng)時間根據(jù)細胞種類的不同和每孔細胞數(shù)量的多少而異。對于貼壁細胞,，加入 CCK-8 的培養(yǎng)時間 一般為 1~4 小時,，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據(jù)細胞種類而定）,。與貼壁細胞相比，懸 浮細胞較難顯色,。對于懸浮細胞,，在加入 CCK-8 培養(yǎng) 1~4 小時后,，可先從培養(yǎng)箱中取出，目測染色程度或用酶標 儀測定決定,。白細胞較難顯色,，因此需要較長的 CCK-8 反應(yīng)時間或增加細胞數(shù)量（~105 個細胞/孔）,。若顯色困難， 可以將培養(yǎng)板放回培養(yǎng)箱,，繼續(xù)培養(yǎng)數(shù)小時后再確定,；注意：CCK-8 的反應(yīng)時間以具體顯色的時間為準,。

5、CCK-8 試劑中的 WST-8 會與還原劑反應(yīng)生成 WST-8 甲臜,，如果實驗中有還原劑,，需要檢查背景的 OD 值,，即在不 含細胞的培養(yǎng)基中加入藥物，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內(nèi)檢測,，和不加藥物的培養(yǎng)基進行比較（只加 CCK-8 試劑）,，如果 OD 值明顯偏高，則說明有反應(yīng),。

6,、若細胞培養(yǎng)時間較長導(dǎo)致培養(yǎng)基顏色或 pH 發(fā)生變化，建議更換新鮮培養(yǎng)基后再加入 CCK-8 試劑,。含有酚紅的 培養(yǎng)基不影響本試劑使用,。

7,、如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議設(shè)定 600nm（或 600nm 以上）作為參比波長,，扣除參比波長的 OD 值即可,。

8、如果要測定細胞的具體數(shù)量,，需要先做一個標準曲線,。

9,、若測得 OD 值過高,，可酌減鋪板細胞數(shù)或 CCK-8 試劑用量。

試劑的優(yōu)點：

1,、結(jié)果準確,，重現(xiàn)性好 試劑不影響細胞活力，顯色產(chǎn)物直接溶解于培養(yǎng)液,，直接測定 OD 值即可， 可準確反 應(yīng)細胞活力,。

2,、操作省時簡單 試劑即開即用,，無需配制；只需一步操作,，即可測定。

3,、安全性好 不含放射性同位素和有害有機溶劑,，使用安全。

4,、靈敏度高 靈敏度高于 MTT,、XTT 和 MTS 等方法。

貯藏條件：

在避光 0-5℃的條件下存放一年,，測定效果*不變。在-20℃的條件下可以貯存更久,。反復(fù)凍融會增加背景 值,，經(jīng)常使用時請于 0~5℃條件下保存,。

本產(chǎn)品僅供科研使用，不做其它用途,。