SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(2×,含TCEP)

產(chǎn)品貨號：T15335

產(chǎn)品規(guī)格：10ml

產(chǎn)品簡介：

蛋白上樣緩沖液主要由TRIS,、SDS,、溴酚藍(lán),、還原劑等組成,。SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷,，這使蛋白質(zhì)本身的電荷被SDS掩蓋,，消除了各種蛋白質(zhì)本身電荷的差異；SDS還可以斷開分子內(nèi)和分子間的氫鍵,，破壞蛋白質(zhì)分子的二級結(jié)構(gòu)和三級結(jié)構(gòu),。還原劑可以斷開半胱氨酸殘基之間的二硫鍵，破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu),，消除了蛋白結(jié)構(gòu)之間的差異,，最終無電荷及結(jié)構(gòu)上差異的蛋白（亞單位），電泳速度只是與其分子量大小有關(guān),。溴酚藍(lán)作為電泳指示劑,，可大概指示電泳結(jié)束的時間。

SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(2×,含TCEP)即SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×,with TCEP),，是一種經(jīng)過改良的更加安全、更加健康的無氣味的以溴酚藍(lán)為染料,，2倍濃縮的蛋白上樣緩沖液,。

本產(chǎn)品使用了無氣味、水溶性更穩(wěn)定,、還原能力相近的還原劑[三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽,TCEP]替代了有氣味的D-二硫蘇糖醇(DTT)或β-巰基乙醇(2-Mercaptoethanol),，從而可以確保本SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液在正常使用或加熱時都不會有異味，使蛋白上樣操作更加安全健康,。該試劑僅用于科研領(lǐng)域,，不適用于臨床診斷或其他用途。

產(chǎn)品組成：

操作步驟(僅供參考):

1. 在室溫或不超過37℃的水浴中溶解SDS-PAGE蛋白加樣緩沖液(2×,，含TCEP),，水浴溶解后立即室溫存放,，盡量避免長時間置于水浴中。使用完畢后應(yīng)置于-20℃保存,。

2. 取適量的蛋白樣品和SDS-PAGE Sample Loading Buffer(2×)等比例混合,，充分混勻。如40ul蛋白樣品加入 40ul上樣緩沖液(2倍稀釋)來使用,。如果蛋白樣品濃度過高,，可用雙蒸水稀釋。

3. 95℃水浴加熱5~10min,，以充分變性蛋白,。

4. 冷卻到室溫后，經(jīng)10000~14000rpm離心2~5min,，取上清直接上樣電泳,。

5. 通常電泳至藍(lán)色染料到達(dá)膠的底部附近即可停止電泳。

注意事項:

1. 本產(chǎn)品用于蛋白變性時,，建議95°℃水浴或PCR儀加熱5分鐘,，溫度過高(如100°℃或時間過長(如超過15分鐘)，有可能會導(dǎo)致蛋白降解或上樣緩沖液中指示劑的顏色異常,。

2. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2×,，含TCEP)中不含劇毒的巰基乙醇和有刺激性氣味的DTT，但還原效果一致,，對于蛋白樣品的處理效果和電泳效果一致,。

3. SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液(2×，含TCEP)必須溶解后再使用,。建議根據(jù)使用量和頻率分裝凍存,，應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4. 本產(chǎn)品含有溴酚藍(lán)指示劑,，pH受溫度影響,，顏色可能有所不同;低溫凍存條件下，呈深棕色~深藍(lán)色凝固狀態(tài),，不影響正常使用,。

5. 本產(chǎn)品稀釋至1×后可以直接用于細(xì)胞或組織樣品的裂解。

6. 加熱前通常會發(fā)現(xiàn)蛋白樣品內(nèi)有粘稠的半透明狀物體,，通常在本上樣緩沖液內(nèi)95℃水浴加熱8~10分鐘后可使該粘稠的半透明狀物體消失,，便于后續(xù)的上樣操作。如果起始時細(xì)胞或組織的用量較大基因組DNA含量較高,，加熱5~10分鐘后有可能仍然比較粘稠或者有粘稠狀的半透明物體,，此時需要再加熱5-10分鐘或者加入適量1×的蛋白上樣緩沖液后再加熱3~5分鐘。充分加熱后一方面可以使結(jié)合在基因組DNA上的蛋白充分釋放,，同時會導(dǎo)致基因組DNA的部分?jǐn)嗔褟亩拐吵砀邢?，這樣就不會影響后續(xù)的上樣操作了,。適當(dāng)超聲或使用1ml注射器反復(fù)抽吸也可以打斷基因組DNA從而使粘稠感消失。

7. 為了您的安全和健康,，請穿實驗服并戴一次性手套操作,。

有效期：12個月有效。