植物核DNA大量提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：BA1848

產(chǎn)品規(guī)格：20T

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

從植物組織中制備基因組DNA較常采用的方法有氯化離心法、CTAB抽提法等。CTAB抽提法是經(jīng)典且迅速的植物DNA提取法,，可以用于多種不同類型植物樣品中DNA的提取，獲得的量很高，但是純度一般,，但是足夠用于大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

植物核DNA大量提取試劑盒是簡(jiǎn)單快速簡(jiǎn)便的提取植物核中DNA的試劑盒,，先將新鮮植物樣本研磨破碎細(xì)胞壁,，采用差速離心法分離出細(xì)胞核并將其破碎，再用CTAB抽提液提取出核DNA,。本法制備量大,，所提DNA可供進(jìn)一步純化及基因轉(zhuǎn)化使用,。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途,。

產(chǎn)品組成：

自備材料：

1. 液氮、研缽或勻漿器

2. 離心機(jī),、離心管

3. 冰箱,、恒溫箱或水浴鍋

4. 二*醚、異丙醇

操作步驟(僅供參考):

(一)樣品處理及分離細(xì)胞核：

1. 稱取10g幼葉樣本或8g愈傷組織等,，置燒杯中,，于通風(fēng)櫥中加入預(yù)冷的二*醚，浸沒(méi)材料,，搖晃1~2min,，傾出二*醚，預(yù)冷的水沖洗樣本。

2. 用刀片去除葉脈，并分割成小塊,，轉(zhuǎn)入勻漿器或研缽中,，加入預(yù)冷的20ml的核分離緩沖液，中速勻漿1~3min。用4層無(wú)菌平紋細(xì)布和1層Miracloth過(guò)濾勻漿至離心管中。

3. 500r/min 4℃離心10min，去上清,。沉淀用1~1.3ml核沖洗緩沖液懸浮，再用500r/min 4℃離心10min（重復(fù)2~3次）,，使細(xì)胞核與細(xì)胞碎片分離,，收集細(xì)胞核樣品。細(xì)胞核可懸浮于核儲(chǔ)存緩沖液中,，-70℃保存,。

(二)細(xì)胞核破碎及DNA提取：

1. 配制核裂解液：按核裂解緩沖液：蛋白酶K溶液=1ml：0.025ml的比例混合即成,。

2. 將上一步分離的核樣品懸浮于0.25ml核裂解液中,，37℃保溫30min。再向其中加入5ul 2-ME 和90℃預(yù)熱的0.25ml CTAB抽提液,，立即混勻,。再加入0.5ml的蛋白沉淀劑，溫和地反復(fù)顛倒離心管,。室溫下10000 r/min離心10min,，上清轉(zhuǎn)入新的離心管,。

3. 加入1/10體積的CTAB溶液(10%)[約0.05ml]。再次加入等體積[約0.5ml]的蛋白沉淀劑,，溫和地顛倒混勻離心管,，室溫下3500 r/min離心10min，上清轉(zhuǎn)入新的離心管,。

4. 加入1/2～2/3體積預(yù)冷的DNA沉淀液,，輕輕混勻，室溫靜置使核酸沉至管底,。如果觀察不到沉淀,，可在室溫下靜置數(shù)小時(shí)至過(guò)夜。

5. 2000g離心2min,，輕輕棄上清液,。松散的DNA沉淀物置于小離心管中加入0.5~1ml DNA洗滌液，室溫靜置10min,，4000r/min離心10min,，收集沉淀，重復(fù)操作兩次,，清除CTAB。

6. 自然干燥DNA,，加入20～50μl TE buffer- RNase A混合液（1ml+1ul）,，37℃保溫1h。加入乙酸銨溶液(7.5M)使終濃度為2.5M,，并加入2倍體積的預(yù)冷無(wú)水乙醇,，溫和混勻，室溫放置10min,。

7. 室溫15000r/min離心10min,，收集沉淀，吹干保存,，使用時(shí)溶于適量TE buffer,，-20℃保存。注意：TE buffer體積越大,，DNA濃度越低,。

注意事項(xiàng):

1. 如果每次的使用量很小，可以適當(dāng)分裝后再使用,。

2. 用于裂解植物組織或葉片越新鮮,，裂解越好、收獲量越大,。

3. 二*醚處理材料可促進(jìn)角質(zhì)層溶解及細(xì)胞破裂,。

4. 提取過(guò)程中的機(jī)械力可使大分子DNA斷裂,，因此各步操作均應(yīng)溫和，避免劇烈震蕩,。

5. 使用到的器皿,、離心管最好經(jīng)過(guò)硅化處理。

6. 為了您的安全和健康,，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作,。

有效期：6個(gè)月有效。