實(shí)時(shí)熒光定量PCR （Quantitative Real-time PCR）是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中，以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法,，通過(guò)內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法,。
技術(shù)原理：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,，后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法,。PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,，終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,，從而進(jìn)入平臺(tái)期。將已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品梯度稀釋進(jìn)行Real Time PCR,，按照起始DNA量由多到少的順序等間隔得到一系列擴(kuò)增曲線(xiàn),。Ct值與起始模板數(shù)的對(duì)數(shù)值之間存在線(xiàn)性關(guān)系，可以制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。未知濃度的樣品也得到Ct值,，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，就可以求出未知樣品的起始模板量,。
PHS智能熒光定量PCR儀主要用于基因擴(kuò)增檢測(cè),，通過(guò)在PCR反應(yīng)體系中加入熒光染料或探針等試劑，熒光型號(hào)不斷累積實(shí)現(xiàn)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)全過(guò)程,，通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),，終達(dá)到檢測(cè)目標(biāo)基因的目的。用于基因定性定量分析,，基因檢測(cè),，基因分型，SNP分析（單核苷酸的多態(tài)性）,，RFLP多態(tài)性分析（限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性）,，基因表達(dá)研究，高通量基因表達(dá)譜研究,，以及STR鑒定等檢測(cè),。
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