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攻略 色譜流動(dòng)相使用不當(dāng)引發(fā)的諸多問題你中了幾招……
流動(dòng)相相當(dāng)于液相色譜系統(tǒng)的血液,，可以想象流動(dòng)相在整個(gè)分離過程中的重要程度,。那么流動(dòng)相在具體應(yīng)用過程中都需要注意什么呢？
01過濾溶劑
溶劑在使用前一定要用0.5μm的過濾器過濾,，如果使用固體化學(xué)試劑（緩沖鹽）配制流動(dòng)相,，過濾特別重要，不能讓固體微粒污染泵,，阻塞進(jìn)樣器和柱頭過濾片,。本實(shí)驗(yàn)室有水溶性和脂溶性兩種過濾膜供選擇（反光面朝上），過濾水溶性流動(dòng)相時(shí)（如甲醇/水）,，先用1～2mL甲醇潤濕過濾膜,，有助于快速抽濾。
02保持儲(chǔ)液瓶的清潔
用普通溶劑瓶作流動(dòng)相儲(chǔ)液器應(yīng)不定期廢棄瓶子,，后一次應(yīng)用HPLC級(jí)的水或溶劑清洗,，不能在清洗過程中留下污跡。
03保證溶劑的質(zhì)量
一定要用HPLC級(jí)的溶劑,，水也應(yīng)達(dá)到HPLC級(jí),，同樣也要使用高純度的緩沖鹽。
一些流動(dòng)相引起的常見
01 流動(dòng)相脫氣不充分
流動(dòng)相受熱,，或者流動(dòng)相不同組分混合時(shí)會(huì)有氣體產(chǎn)生,，氣泡進(jìn)入泵內(nèi)引起壓力波動(dòng)，增加噪音,，色譜圖上出現(xiàn)毛刺,。可試用下列方法解決問題：流動(dòng)相再脫氣;采用更有效的脫氣方法或兩種方法配合使用;改系統(tǒng)內(nèi)混合為系統(tǒng)外預(yù)混合,。
02 流動(dòng)相供給不暢
流動(dòng)相用完,，管道中吸入氣體引起泵壓力不穩(wěn)。應(yīng)經(jīng)常觀察儲(chǔ)液器中流動(dòng)相的量,，加足流動(dòng)相保證所有的樣品分析完畢,。輸液管道上裝沉子沉至瓶底,，儲(chǔ)液器蓋上留一小孔正好夾住進(jìn)液管，使其不能上下移動(dòng),。
過濾器阻塞引起管道和泵腔空化,，壓力不穩(wěn),。過濾器被微粒所阻塞或長霉,，去掉過濾器后如果系統(tǒng)運(yùn)轉(zhuǎn)正常,，說明已找出問題，換上新的過濾器則可,。有時(shí)候換上新的過濾器仍然不暢,，那就需要查查流動(dòng)相的制備過程，或者換大孔徑的過濾器。不管如何,，流動(dòng)相都需要重新過濾。
流速過高,、阻力大,，造成空化現(xiàn)象，這是由于過濾器孔徑,、管道內(nèi)徑,、流速和溶劑黏度等引起的。如果流速大于10mL/min,，常會(huì)出現(xiàn)這種現(xiàn)象,。
解決方法如下：
(1)使用低流速;
(2)換大孔徑的過濾器;
(3)增加進(jìn)液管道內(nèi)徑;
(4)抬高或加壓儲(chǔ)液器;
(5)不用過濾器，但流動(dòng)相一定要先過濾;
(6)儲(chǔ)液器蓋子太緊,，在儲(chǔ)液器內(nèi)形成真空,，打出的流動(dòng)相不連續(xù)。應(yīng)松開蓋子或留有1mm的縫隙;
(7)進(jìn)液管道阻塞或彎曲使泵抽不到液,，注意調(diào)整進(jìn)液管道或更換新的,。其它問題包括滲漏或接頭松動(dòng)、泵部件損壞等,，都能引起供液不正常,。
03 流動(dòng)相和儲(chǔ)液器被污染
由于污染，噪音越來越大,，檢測器基線上升,。污染物可能被泵以穩(wěn)定的濃度打入系統(tǒng)，而再以穩(wěn)定的濃度流出來,，所以在色譜圖中不出多余的峰,。用梯度洗脫時(shí)弱流動(dòng)相可以使污染物聚在柱頂，流動(dòng)相強(qiáng)度增加后污染物可能被洗脫出來一個(gè)大的偽峰,。有時(shí)基線噪音突然增大或突然提高,，都是因?yàn)榉磸?fù)加進(jìn)新的流動(dòng)相或系統(tǒng)用得太久(通宵)所造成的。新加進(jìn)的流動(dòng)相有污染物或者流動(dòng)相長霉,，繁殖了細(xì)菌,。
臟的儲(chǔ)液器會(huì)污染清潔的流動(dòng)相。每種流動(dòng)相備有的儲(chǔ)液器,，或者定期報(bào)廢儲(chǔ)液器,。
04 流動(dòng)相污染原因及解決方法
試劑質(zhì)量不高，玻璃器皿不合格; 因此要求高純度化學(xué)試劑和HPLC級(jí)溶劑;玻璃器皿按規(guī)定清洗干凈,。
微生物的影響; 為防止微生物生長,，每天要用甲醇清洗系統(tǒng);懷疑系統(tǒng)內(nèi)生長了微生物，可用稀硝酸沖洗即可(注意不要損壞柱和管道系統(tǒng)),。
配制流動(dòng)相時(shí)操作不當(dāng)?shù)? 真空脫氣時(shí)防止泵油帶入流動(dòng)相;用清潔的惰性塞子,、攪棒,、過濾器和玻璃器皿配制流動(dòng)相。
已經(jīng)污染的流動(dòng)相一定要廢棄掉,。