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操作液相的三個關(guān)鍵詞都在這里......
高效液相色譜儀（HPLC）現(xiàn)已成為有機化學(xué)分析的重要手段之一,，已成為*的分析儀器。不管你買十幾萬還是幾十萬的液相,，都與液相的操作有關(guān),，關(guān)于液相的操作注意事項，重要的有三點：脫氣,、過濾和沖洗,。
脫 氣
流動相使用前必須進行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如O2）,，以防止在洗脫過程中當(dāng)流動相由色譜柱流至檢測器時,，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會增加基線的噪音,，造成靈敏度下降,，甚至無法分析,。溶解的氧氣還會導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能,。若用FLD,，可能會造成熒光猝滅。常用的脫氣方法有如下幾種：
1.吹氦脫氣法：
利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性,，采用一個高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動相中將等體積的幾乎全部氣體排除,。這意味著1L氦氣通過1L流動相就可完成排氣這個工作,。這種脫氣方法雖然好，但我們國內(nèi)氦氣價格較高,，很少有實驗室采用此方法,。
2.加熱回流法：
此法的脫氣效果較好。在操作時要注意冷凝塔的冷卻效率,，否則溶劑會丟失,，混合流動相的比例會有變化。
3.抽真空脫氣法：
此法可使用真空泵,，降壓至0.05～0.07MPa 即可除去溶解的氣體,。但是由于真空脫氣會使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實驗的重現(xiàn)性,，因此多用于單溶劑體系的簡單分析,。
4.超聲波脫氣法：
將欲脫氣的流動相置于超聲波清洗器中，用超聲波震蕩10～20min,。此法的脫氣效果差,。
5.在線脫氣法：
現(xiàn)在商品的HPLC 儀器，均可配在線脫氣機,。在線脫氣使用簡單,，低故障，有效,。建議購買儀器時一定要購買,，有的公司是作為選購件，所以與儀器公司談配置時應(yīng)與公司確認,。
過 濾
任何顆粒物進入HPLC系統(tǒng)后都會在柱子入口端被篩板擋住,，所造成的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形,。因此,，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過濾設(shè)計,，努力防止或減少顆粒物進入HPLC系統(tǒng)中,，從而延長儀器和色譜柱的使用壽命,，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在HPLC系統(tǒng)中,，顆粒物的主要來源有三個途徑：流動相,、被測樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1.流動相
如果流動相均由高效液相色譜級溶劑組成,，流動相沒有必要過濾,。這是因為高效液相色譜級的有機溶劑，例如乙腈,、甲醇等,，在制造的工藝過程中都已經(jīng)過了0.2μm微孔濾膜過濾。然而,，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物,，例如，磷酸鹽,，流動相過濾將是必要的一個步驟,。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的,，但它還是可能含有顆粒物質(zhì),。因此，流動相制備僅采用HPLC級液體時不需要過濾,，反之所有流動相組成在使用前必須過濾,。
2.被測樣品
液相系統(tǒng)中的第二個顆粒物來源是被測樣品。你使用了針筒式過濾器就不可能100%得到通過過濾器的被測樣品,，總會有或多或少的丟失,。丟失來自這樣幾方面：過濾器濾膜的吸附、過濾器濾出的顆粒物上的吸附,、針筒式濾膜過濾器與針筒連接處的滲漏等,。所以過濾這步已成為*的一步。在實際分析工作中,，一般檢測每一組樣品會帶一個外標(biāo),、一個添加回收或是質(zhì)控樣品，所以,，只要終檢測時得到的信噪比能滿足檢出限要求,，可將這步視為系統(tǒng)誤差而忽略。
3.儀器系統(tǒng)部件的磨損物
后,，在HPLC系統(tǒng)中顆粒物的另一個主要來源是輸液泵密封墊和進樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損,。關(guān)于輸液泵密封墊的磨損更換有兩種不同建議。一種建議認為建議半年或一年更換這些密封墊，實驗室應(yīng)基于上述觀點制定定期預(yù)防性維護計劃,。另一種建議則認為,，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。兩種說法都有其道理,，具體如何操作,，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的,。
沖 洗
使HPLC系統(tǒng)良好運行的第三個要點是保持系統(tǒng)的清潔,。你需要關(guān)注流動相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方，對于這些地方經(jīng)常性的沖洗,，將使你的系統(tǒng)保持在“Ready”狀態(tài)：
1.流動相儲液瓶
首先要經(jīng)常清洗流動相儲液瓶,，或者每做一批新樣品更換一次流動相。一個臟的儲液瓶將會污染注入的流動相,。建議儲液瓶中緩沖液使用時間不要超過一周，而有機溶劑使用時間不要超過一個月,。儀器公司的工程師建議儲水瓶的水要天天換,，每周瓶子還應(yīng)該用異丙醇清洗一次。有的實驗室則在水里加入0.1～1 mM的甲酸抑制微生物的生長,。
2.泵
接下來要沖洗的是泵,。千萬不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當(dāng)流動相中含有難揮發(fā)的緩沖液（如磷酸鹽）時,。如果儀器不是連續(xù)使用,，當(dāng)流動相蒸發(fā)時，難揮發(fā)物就會粘在活塞密封墊的表面,，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀,。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以,，無論使用長短,，在停泵以前一定要用非緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，要是流動相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時間應(yīng)該更長些,。
3.自動進樣器
自動進樣器也要按規(guī)定清洗?，F(xiàn)在的儀器多配有自動進樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時更換,、補充沖洗液即可,。自動進樣器用的洗滌液也要采用與流動相相同的方式處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定,，清洗儲液瓶或更換洗滌液?，F(xiàn)在的自動進樣器設(shè)置、操作都很簡單,，如果時間允許（特別是利用夜間運行）,，每次分析完后設(shè)置進1,、2針純?nèi)軇ㄈ缂状肌⒁译妫?/span>也是一個好做法,。
4.色譜柱
對柱子的污染是隨使用時間而增加,。通常表現(xiàn)是：運行走基線時在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加,。解決這個問題的有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時用大量的流動相沖洗柱子（例如甲醇,、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好,，具體的比例要根據(jù)柱子的說明書和性質(zhì)而定,。
5.檢測器
如果是正常使用，檢測器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說明書規(guī)定進行洗,。例如UV/VIS檢測器或FL檢測器,，在對柱子和系統(tǒng)進行沖洗時也就一同對檢測器流通池中污染物進行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測器或質(zhì)譜儀則需要按照說明書進行定期清洗,。因而,，需要定期清洗。而且對連有這些檢測器的系統(tǒng)沖洗時,，要將與這些檢測器斷開,，以減少對檢測器的污染。
總之,，實驗室日常使用的液相色譜儀要是能認真做好這三項工作——脫氣,、過濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護,，使用時就會感到比較順手,。當(dāng)然，在實際操作時遇到的問題并沒有這么簡單,，但這三個良好習(xí)慣將是正確操作,、使用HPLC系統(tǒng)的基礎(chǔ)。