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產(chǎn)品名稱：兔牙髓干細(xì)胞
組織來源：牙髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔牙髓干體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡介：
兔牙髓干分離自牙髓組織,；牙髓組織位于牙齒內(nèi)部的牙髓腔內(nèi),。牙髓腔的外形與牙體形態(tài)大致相似，牙冠部髓腔較大,，稱髓室,，牙根部髓腔較細(xì)小，稱根管，根尖部有小孔,，稱根尖孔,。牙髓組織主要包含神經(jīng)、血管,，淋巴和結(jié)締組織,，還有排列在牙髓外周的造牙本質(zhì)細(xì)胞，其作用是造牙本質(zhì),。牙髓因受到病源刺激物的作用不同以及機(jī)體抵抗力的差異,，出現(xiàn)不同的病理變化，在臨床上會表現(xiàn)為一系列不同的癥狀和體征,。牙髓充血狀況持續(xù)時間較長后,，轉(zhuǎn)化為急性牙髓炎癥。間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,，MSCs)來源于胚胎時期的中胚層組織,，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，具有向脂肪細(xì)胞,、成骨細(xì)胞,、軟骨細(xì)胞及肌細(xì)胞等多種終末細(xì)胞定向分化的能力，運(yùn)用 MSCs來修復(fù)軟骨損傷具有很好的應(yīng)用前景,，目前已能夠從骨髓,、脂肪、滑膜,、骨骼,、肌肉等組織以及羊水、臍帶,、臍帶血中分離和制備間充質(zhì)干細(xì)胞,。
方法簡介：
實驗室分離的兔牙髓干采用膠原酶消化法、低密度稀釋克隆制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔牙髓干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）,、對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細(xì)胞如何處理,？
1,、首先，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運(yùn)輸問題，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時，若細(xì)胞密度超過80%,，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml；若細(xì)胞密度未超過80%,，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作
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