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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療,!
產(chǎn)品名稱:兔肺小動脈平滑肌細胞
組織來源:肺小動脈
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔肺小動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介:
兔肺小動脈平滑肌分離自肺小動脈組織,;小動脈(smallartery),管徑在0.3-1mm之間,,小動脈包括粗細不等的幾級分支,,也屬肌性動脈。較大的小動脈,,內(nèi)膜有明顯的內(nèi)彈性膜,,中膜有幾層平滑肌,外膜厚度與中膜相近,,一般沒有外彈性膜,。小動脈是決定周圍循環(huán)阻力大小的主要因素,也是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“總開關(guān)",。典型的小動脈,,其管壁的厚度與管徑相比約為1∶2,。中膜的肌層相對比其他動脈為厚,當平滑肌在神經(jīng)支配下強力收縮時,,其管腔可以閉塞,,而使血液不能流入它所分布的毛細血管內(nèi),從而增加了周圍血液循環(huán)的阻力,。如果有許多小動脈同時收縮,,可使血壓顯著上升。反之,,當小動脈的平滑肌舒張時,,則可使大量的血液流入毛細血管,外周阻力明顯下降,,血壓降低,。終末小動脈(terminal arteri-ole)的口徑為20-30μm;后小動脈(metar-teriole),,又稱毛細血管前小動脈(precapil-lary arteriole)的口徑為12-15μm,。管壁內(nèi)均有較稀疏的平滑肌,在毛細血管前小動脈分支的起始部分,,管壁平滑肌成分增厚,,叫做毛細血管前括約肌(precapillary sphinc-ter),,其收縮或舒張,,可調(diào)節(jié)真毛細血管的血流量,是調(diào)節(jié)微循環(huán)灌注量的“分開關(guān)",。
方法簡介:
實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔肺小動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。
二,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
a)、對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細胞如何處理,?
1、首先,,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請拍照,,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3、仔細閱讀細胞說明書,,了解細胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸浮),、細胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代,;若未超過80%,,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細胞密度超過80%,,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補加培養(yǎng)基至5ml,;若細胞密度未超過80%,,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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