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產(chǎn)品名稱：兔食管上皮細胞

組織來源：食管

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：上皮細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔食管上皮體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

兔食管上皮分離自食管組織,；食管是咽和胃之間的消化管,，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降,，而逐漸增長,。食管可分為頸段、胸段和腹段,。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端,，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi),，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連,，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中,，食管的上皮細胞增殖,，由單層變?yōu)閺蛯樱彻苁构芮蛔儶M窄,，甚至一度閉鎖,，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動物的食管結構上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層,、肌層和外膜,。其中，黏膜層,，包括上皮,、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復層扁平上皮,，耐摩擦,，有保護作用。在食管與胃賁門交界處,，復層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮,。食管被一層線性排列的、無角化,、潮濕的復層扁平上皮細胞覆蓋,，其頂端細胞膜和細胞間連接復合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入,。特別的是,，層屏障使表層細胞的基質(zhì)外側細胞膜和深層細胞的全部細胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學上講,，食管上皮由兩層組成,，基底層和分化層；其中,，僅基底層的細胞可以增殖,，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標記的依序表達,。食管上皮細胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機制和食管癌變機制的非常好的體外模型,。

方法簡介：

實驗室分離的兔食管上皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔食管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度,。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）,、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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