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產(chǎn)品名稱：兔腎小球系膜細胞

組織來源：腎

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔腎小球系膜體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞簡介：

兔腎小球系膜分離自腎小球組織,；腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團毛細血叢,，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構造,。血液經(jīng)由入球小動脈進入腎小球,。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈,，而是流入出球小動脈,。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓,，而加速了超濾作用（hyperfiltration）的進行,。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液,，滲入鮑氏囊內(nèi),。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率,。腎小球系膜是位于腎小球毛細血管袢之間的一種特殊間充質,，由系膜細胞和系膜基質組成。腎小球系膜細胞是腎小球內(nèi)非?；钴S的細胞,，具有分泌細胞基質、產(chǎn)生細胞因子,、吞噬和清除大分子物質及類似平滑肌細胞收縮的功能,。腎小球系膜細胞增生和基質的過多產(chǎn)生是多種腎小球腎炎的主要病理表現(xiàn)。腎小球系膜細胞的培養(yǎng)是研究系膜擴張,、瘢痕形成和腎小球硬化的理想方法,。系膜細胞的主要作用可能有：①收縮作用,，入球小動脈和出球動脈的收縮作用受系膜細胞的調節(jié)，以影響毛細血管袢的內(nèi)壓和濾過率,；②支持作用,，它填充于毛細血管袢之間，支持毛細血管的位置,；③吞噬作用,，能吞噬被阻留在基膜內(nèi)的大分子物質和蛋白質；④分泌腎素,，在腎缺血或免疫復合物沉積時,，系膜細胞增生且分泌腎素。

方法簡介：

實驗室分離的兔腎小球系膜采用機械研磨法結合不同孔徑不銹鋼網(wǎng)篩過濾后使用膠原酶消化制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

實驗室分離的兔腎小球系膜經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理,？

1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。

4,、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作