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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品、臨床或動物的診斷或治療,！
產(chǎn)品名稱：兔破骨細胞
組織來源：骨髓
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：多核,、巨細胞
傳代特性：屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%
體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介：
兔破骨分離自骨組織和骨髓；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞,，位于骨組織表面的淺凹處,。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng)，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞,。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡,，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化。因此多數(shù)學(xué)者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結(jié)構(gòu),、功能探討骨吸收,，形成相互平衡的機制。但破骨細胞是一種終末分化細胞,，屬于不增殖細胞群,，不能增殖和傳代，只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短,。
方法簡介：
實驗室分離的兔破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導(dǎo)法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔破骨經(jīng)TRAP染色檢測,，純度可達30%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟：
一,、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細胞如何處理,？
1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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