詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
脊髓組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 神經(jīng)元細胞樣 | YS-01X7220 |
細胞簡介:
兔脊髓神經(jīng)元分離自脊髓組織;脊髓是細細的管束狀的神經(jīng)結(jié)構(gòu),,位于脊柱的椎管內(nèi)且被脊椎保護;是源自腦的中樞神經(jīng)系統(tǒng)延伸部分。中樞神經(jīng)系統(tǒng)的細胞依靠復(fù)雜的聯(lián)系來處理傳遞信息,。脊髓的主要功能是傳送腦與外周之間的神經(jīng)信息,。人和脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的一部分,在椎管里面,,上端連接延髓,,兩旁發(fā)出成對的神經(jīng),分布到四肢,、體壁和內(nèi)臟,。脊髓的內(nèi)部有一個H形(蝴蝶型)灰質(zhì)區(qū),主要由神經(jīng)細胞構(gòu)成,;在灰質(zhì)區(qū)周圍為白質(zhì)區(qū),,主要由有髓神經(jīng)纖維組成;脊髓是許多簡單反射的中樞,。脊髓兩旁發(fā)出許多成對的神經(jīng)(稱為脊神經(jīng))分布到全身皮膚、肌肉和內(nèi)臟器官,。脊髓是周圍神經(jīng)與腦之間的通路,,也是許多簡單反射活動的低級中樞。按脊神經(jīng)的出入可把脊髓也分為相應(yīng)的31節(jié),,31對脊神經(jīng)就是由不同的脊椎發(fā)出的,。神經(jīng)系統(tǒng)最基本的結(jié)構(gòu)和功能單位是神經(jīng)元,即神經(jīng)細胞,,其大小和外觀在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中差異很大,。但都具有胞體和樹突、軸突,。胞體又叫核周體,,內(nèi)含神經(jīng)絲、微管,、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),、游離核糖體和一個有明顯核仁的核。一些大神經(jīng)元突起的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)可用Nissl染色顯示,,在光鏡下是灰藍色斑塊狀,,稱為尼氏小體。樹突和軸突是神經(jīng)元的突起,,能在神經(jīng)元之間傳遞電沖動,,突起的大小和形態(tài)各不相同,很難用常規(guī)的顯微鏡鑒別,。脊髓組織內(nèi)含有大量膠質(zhì)細胞,,神經(jīng)元含量少,分離純化難度大,且脊髓神經(jīng)元細胞是高度分化的終末細胞,,不能分裂增殖,,培養(yǎng)要求高。剛接種的脊髓神經(jīng)元呈圓形,,體積小,,透亮,無突起,。培養(yǎng)2-3d,,可見胞體增大,突起增多延長,;培養(yǎng)6-7d,,細胞體大飽滿,突起明顯增加延長并交織成網(wǎng),,光暈明顯,,立體感強。培養(yǎng)20d后,,死亡細胞明顯增加,,細胞出現(xiàn)內(nèi)空泡,突起粗細不均,,甚至脫壁,,發(fā)生細胞崩解。
方法簡介:
公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元采用膠原酶&聯(lián)合消化法,、神經(jīng)元專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選結(jié)合化學試劑抑制法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的兔脊髓神經(jīng)元經(jīng)β-Tubulin免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27 Supplement、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 神經(jīng)元細胞樣
傳代特性 屬于終末分化細胞,;屬于不增殖細胞群
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠IP-10(mouse IP-10) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠8異前列腺素(mouse 8-iso-PG) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠白三烯B4(mouse LTB4) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠瘦素(mouse Leptin) 作用: ELISA 規(guī)格: 進口分裝
小鼠骨堿性0酸酶(BALP)試劑盒
Human growth hormone releasing peptide (GHRP) ELISA Kit 人生長激素釋放多肽(GHRP)試劑盒
Humangasicinhibitorypolypeptide,GIPELISAKit 人胃抑素(GIP)試劑盒 進口分裝
Humanai-ribonucleoproteinAibody,RNP-Ab試劑盒人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)試劑盒
植物細胞原生質(zhì)體化學轉(zhuǎn)染試劑盒10次
HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅠ,TNFsR-ⅠELISAKit人壞死因子可溶性受體Ⅰ(TNFsR-Ⅰ)試劑盒
Rad52抗體
淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒LCMV L抗體
NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein
NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)
SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標簽) Protein
FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白
CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標簽)
NOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1 0.5mgNOS-1(bNOS:neuronal NOS:nNOS:Nitric Oxide synthase-1) 合成酶-1(抗原)
FAM3C Protein Human 重組人 FAM3C / ILEI 蛋白
NRG1重組狗 NRG1-alpha 蛋白 (EGF Domain, Fc 標簽) Protein
CES1D Protein Mouse 重組小鼠 CES3 / Carboxylesterase-3 / CES1D 蛋白 (His 標簽)
SMOC1重組人 SMOC1 蛋白 (His 標簽) Protein
兔脊髓神經(jīng)元細胞大鼠粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GMCSF)試劑盒 ,,英文名: GMCSF ELISA Kit
Mouse Helicobacter pylori IgG (Hp-IgG) ELISA Kit 小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)試劑盒
RatPeroxisomeProliferator-activatedreceptorγ,PPAR-γELISAKit 大鼠過氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforGAG(Humanglycosaminoglycan)ELISAKit人糖胺聚糖試劑盒
細胞果糖-1,6-二0酸縮酶(ALD)定量試劑盒20次
RatProstaglandinE2,PG-E2ELISAKit大鼠前列腺素E2(PGE2)試劑盒
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。