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產(chǎn)品名稱：兔骺軟骨細胞

組織來源：生長板組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每3-4天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、多角形

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)優(yōu)良

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

細胞簡介：

兔骺軟骨分離自骨骺生長板；骨骺生長板位于長骨兩端骨骺和骨干之間的軟骨組織,，其中的骺軟骨細胞可分裂,、成熟、肥大,，最終被骨組織所替換,，對于長骨生長具有重要作用。幼稚的骺軟骨細胞位于軟骨組織的表層,，單個分布,、體積較小、呈橢圓形,，長軸與軟骨表面平行,，越向深層的骺軟骨細胞體積之間增大呈圓形，細胞核圓形或卵圓形,，染色淺,，細胞質弱嗜堿性，常見數(shù)量不一的脂滴,。成熟的骺軟骨細胞多2-8個成群分布于軟骨陷窩內,，這些骺軟骨細胞由同一個母細胞分裂增殖而成，稱為同源細胞群,。電鏡下,，骺軟骨細胞有突起和皺褶，細胞質內有大量的粗面內質網(wǎng)和發(fā)達的高爾基復合體及少量的線粒體,。在組織切片中,，骺軟骨細胞收縮為不規(guī)則形,，在軟骨囊和細胞之間出現(xiàn)較大的腔隙。體外培養(yǎng)的骺軟骨細胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義,。

方法簡介：

公司實驗室分離的兔骺軟骨采用膠原酶-聯(lián)合消化并軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的兔骺軟骨經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理？

1,、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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