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參考價(jià)	￥1-￥6200	/件

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
貨號	YS-01X7983	主要用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

兔肝外膽管上皮細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：核纖層蛋白相關(guān)蛋白1B抗體胎盤蛋白20抗體腫瘤抑制基因PEPE1抗體兔骨細(xì)胞人前列腺成纖維細(xì)胞 ONS-76人腦髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞 THP-1 (人單核細(xì)胞白血病)

詳細(xì)介紹

兔肝外膽管上皮細(xì)胞

兔肝外膽管上皮細(xì)胞

商品屬性：

組織來源	產(chǎn)品規(guī)格	細(xì)胞形態(tài)	貨號
膽管	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶	上皮細(xì)胞樣	YS-01X7983

細(xì)胞簡介：

兔肝外膽管上皮分離自肝外膽管組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官,，并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹,，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,，僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接,。臨床上常見的膽管病變?nèi)缒懙篱]鎖,、先天性膽總管囊腫、原發(fā)性硬化性膽管炎等,，都是以膽管上皮細(xì)胞為病變的靶位,，引起膽管上皮的損傷。了解正常膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變膽管上皮細(xì)胞的病理生理學(xué)特征對研究膽管病變的發(fā)病機(jī)制,、診斷和治療具有重要意義。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細(xì)胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性,；

　　2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些，至少為5×108細(xì)胞/L,；

　　3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；

　　4,、胎牛血清濃度為10%-80%

　　5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落，漂??；

　　7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液,；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。

　　二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；

　　2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,；

　　3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn),；

　　4,、長期培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長；

　　5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝外膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化,，接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中,，通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔肝外膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳1-2代

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔肝外膽管上皮細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存：

細(xì)胞傳代步驟

細(xì)胞凍存步驟

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

兔肝外膽管上皮細(xì)胞