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產(chǎn)品名稱:兔肝實質(zhì)細(xì)胞
組織來源:肝臟
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1代,,不建議傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞簡介:
兔肝實質(zhì)分離自肝臟組織,;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,,并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用,;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,,位于機(jī)體中的腹部位置,,在右側(cè)橫隔膜之下,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,,胃的上方,。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,,為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,,又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,,僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,,肝上面則與膈及腹前壁相接。肝實質(zhì)細(xì)胞是指具有肝功能的單位,,是肝臟的基本組成單位之一,。肝實質(zhì)細(xì)胞與主要病生理變化:急性肝炎、肝硬化,、肝膿腫,。肝實質(zhì)細(xì)胞屬于中高度分化細(xì)胞,生長營養(yǎng)需求高,,在體外存活時間短,;細(xì)胞呈圓形或多角形,核大而圓,,居中,,常染色質(zhì)豐富,部分有雙核或多倍體核,。肝臟作為體內(nèi)重要的器官,,在整個物質(zhì)代謝過程中具有廣泛而多樣的作用。
方法簡介:
實驗室分離的兔肝實質(zhì)采用混合酶灌流消化,、反復(fù)低速離心制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔肝實質(zhì)經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)步驟:
一,、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),,培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二,、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a),、對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b),、對于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細(xì)胞如何處理?
1,、首先,,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有,請拍照,,并及時與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),。
2、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題,部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓?xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基,、血清比例、所需細(xì)胞因子,、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢、拍照,,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。
5、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長密度超過80%,,可正常傳代,;若未超過80%,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細(xì)胞密度超過80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml;若細(xì)胞密度未超過80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作
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小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA 試劑盒 96T/48T
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KIAA1161蛋白抗體
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RNASE1重組人 RNase A / Ribonuclease A / RNASE1 蛋白 Protein
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GPT2 Protein Rat 重組大鼠 GPT2 蛋白
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CNTF Protein Human 重組人 CNTF 蛋白
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