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產品名稱：大鼠棕色脂肪干細胞

組織來源：脂肪組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右,；3代以內狀態(tài)最佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠棕色脂肪干分離自棕色脂肪組織,；動物體內存在棕色和白色兩種脂肪,，白色脂肪堆積在皮下，負責儲存多余熱量,；棕色脂肪負責分解引發(fā)肥胖的白色脂肪，將后者轉化成二氧化碳,、水和熱量,，本身不儲存熱量。棕色脂肪組織呈棕色,，其特點是組織中有豐富的毛細血管,，脂肪細胞內散著許多小脂滴，線粒體大而豐富,，核圓形,，位于細胞中央，這種脂肪細胞也稱為多泡脂肪細胞,。棕色脂肪組織在成年動物極少,，新生兒及冬眠動物較多，在新生兒主要分布在肩胛間區(qū),、腋窩及頸后部等處。棕色脂肪組織僅在嬰兒時期發(fā)揮作用,，它們堆積在新生兒肩胛處,，幫助維持體溫。隨著年齡增長,，棕色脂肪會逐漸消失。最終,，動物體內只殘存少量棕色脂肪細胞，分布于頸部和鎖骨,。脂肪干細胞（ADSCs）是一種具有多向分化潛能的干細胞,，主要恢復組織細胞的修復功能，促進細胞的再生,，恢復年輕面容的同時，身體機能也得到充分改善,，有效改善亞健康,、早衰等疾病，由內而外真正的有效抵抗衰老,。脂肪干細胞具有很多優(yōu)點：①具有自我更新及多向分化的潛能,；②來源充足；③對供區(qū)的創(chuàng)傷較??；④獲得率及體外擴增速率高。脂肪干細胞是目前被廣泛應用于組織工程領域中理想的種子細胞,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪干采用膠原酶消化法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠棕色脂肪干經CD90免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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