詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
胰腺組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7075 |
細(xì)胞簡介:
大鼠胰腺導(dǎo)管上皮分離自胰腺組織;胰腺分為外分泌腺和內(nèi)分泌腺兩部分。外分泌腺由腺泡和腺管組成,,腺泡分泌胰液,,腺管是胰液排出的通道。胰液中含有,、原,、脂肪酶、等,。胰液通過胰腺管排入十二指腸,,有消化蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用,。內(nèi)分泌腺由大小不同的細(xì)胞團──胰島所組成,,胰島主要由4種細(xì)胞組成:α細(xì)胞、β細(xì)胞,、γ細(xì)胞及PP細(xì)胞,。α細(xì)胞分泌胰高血糖素,升高血糖,;β細(xì)胞分泌胰島素,,降低血糖;γ細(xì)胞分泌,,以旁分泌的方式抑制α,、β細(xì)胞的分泌;PP細(xì)胞分泌胰多肽,,抑制胃腸運動,、胰液分泌和膽囊收縮。成體胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞作為胰腺前體細(xì)胞,,已證實具多向分化潛能,,在合適的外源性刺激下可分化成胰島樣細(xì)胞,胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的胰島樣細(xì)胞免疫原性如何,,轉(zhuǎn)分化的胰島樣細(xì)胞在治療糖尿病時是否發(fā)生免疫排斥反應(yīng),,對干細(xì)胞臨床治療糖尿病具有重要意義。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行,。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠胰腺導(dǎo)管上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合密度梯度離心法,、差速貼壁法,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠胰腺導(dǎo)管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠骨成型蛋白7(BMP-7)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISAKit ELISA. 96T/48T
小鼠葡萄糖氧化酶(GOD)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat somal cell derived factor 1A (SDF-1a/CXCL12) ELISA Kit 大鼠基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)試劑盒
Humanai-cyclicciullinatedpeptide,CCPELISAKit 人抗環(huán)胍肽抗體(CCP)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HeneggImmunoglobulinofYolk,IgY試劑盒雞卵黃免疫球蛋白(IgY)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母細(xì)胞細(xì)胞壁分離試劑盒20次
mouseBeta-Endorphin,β-EPELISAKit小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
肌微管素相關(guān)蛋白11抗體
細(xì)胞表面趨化因子受體6(CD196)抗體
F3重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 Protein
ER-alpha 雌激素受體alpha 0.5mgER-alpha 雌激素受體alpha
IGFBP6重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 Protein
CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽)
CEACAM1 Protein Mouse 重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白
ER-alpha 雌激素受體alpha 0.5mgER-alpha 雌激素受體alpha
CSF1R Protein Human 重組人 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 蛋白 (aa 543-922, His & GST 標(biāo)簽)
F3重組大鼠 Coagulation Factor III / Tissue Factor / CD142 蛋白 Protein
CEACAM1 Protein Mouse 重組小鼠 CEACAM1 / CD66a 蛋白
IGFBP6重組人 IGFBP6 / IBP-6 蛋白 Protein
大鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞大鼠腫瘤壞死因子α(TNFα)試劑盒 ,,英文名: TNFα ELISA Kit
Mouse soluble P selectin (sP-selectin) ELISA Kit 小鼠可溶性P選擇素(sP-selectin)試劑盒
MouseErythropoietin,EPOELISAKit 小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanImmunoglobulinA,IgAELISAKitA
微型RNA(miRNA)文庫構(gòu)建技術(shù)試劑盒5次
ELISAKitMT大鼠金屬硫蛋白