詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
胎盤組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X7659 |
細(xì)胞簡介:
大鼠羊膜上皮分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),,而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性,。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,,以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤,。羊膜是胎盤的最內(nèi)層,與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似,,含有眼表上皮細(xì)胞,,包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長所需要的物質(zhì),其光滑,,無血管,、神經(jīng)及淋巴,具有一定的彈性,;在電鏡下,,其分為五層:上皮層、基底膜,、致密層,、纖維母細(xì)胞層和海綿層,羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元,,主要為Ⅰ,、Ⅲ、Ⅳ,、Ⅴ,、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份,。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成,均具有多分化潛能,,可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元,,且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營養(yǎng)因子的功能,。
方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠羊膜上皮采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠羊膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳1-2代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠CXCR4(mouse CXCR-4) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠皮質(zhì)(mouse Coicosterone) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠環(huán)氧化酶-2 (mouse COX-2) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠結(jié)締組織生長因子(mouse CTGF) 作用: ELISA 規(guī)格: 進(jìn)口分裝
小鼠鉤端IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒
Human cyclophilin A (CyPA) ELISA Kit 人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素A(CyPA)試劑盒
HumanLeptinSolubleReceptor,sLRELISAKit 人可溶性瘦素受體(sLR)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanai-teichoicacidaibody,TA試劑盒人抗0壁酸抗體(TA)試劑盒
植物線粒體粗提分離試劑盒10次
Humani-iodothyronine,,T3ELISAKit人三甲狀腺原(T3)試劑盒
肌醇四磷酸激酶1抗體
微絲相關(guān)蛋白1抗體
EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein
乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)
IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein
FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標(biāo)簽)
NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2
乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)重組蛋白 Recombinant Milk Fat Globule EGF Factor 8 (MFGE8)
FCGR2A Protein Human 重組人 CD32a / FCGR2A 蛋白 (166 Arg, His 標(biāo)簽)
EFNA5重組人 Ephrin-A5 / EFNA5 蛋白 Protein
NS2 Protein H1N1 重組甲型流感 H1N1 (A/Puerto Rico/8/34/Mount Sinai) Non-structural Protein 2 / NS2
IL17F重組人 IL-17F / IL17F 蛋白 Protein
大鼠羊膜上皮細(xì)胞大鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員1A(TNFRSF1A)試劑盒 ,英文名: TNFRSF1A ELISA Kit
Mouse granzyme B (Gzms-B) ELISA Kit 小鼠顆粒酶B(Gzms-B)試劑盒
MousesolubleendothelialproteinCreceptor,sEPCRELISAKit 小鼠可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanImmunoglobulinM,IgMELISAKitM
微型RNA(miRNA)同位素探針制備試劑盒10次
ELISAKitAmAC-1大鼠巨噬細(xì)胞替代激活相關(guān)化學(xué)因子1
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn),;
4、長期培養(yǎng)時(shí),,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長,;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。