詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
心臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7271 |
細(xì)胞簡介:
大鼠心肌成纖維分離自心臟組織,;心臟由心肌細(xì)胞和非心肌細(xì)胞組成,,非心肌細(xì)胞占細(xì)胞總數(shù)的70%,,其中90%以上的非心肌細(xì)胞由心肌成纖維細(xì)胞組成,。成纖維細(xì)胞(Fibroblast)是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng),,在一定條件下,它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的心肌成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長,不聚集成團(tuán),;細(xì)胞生長迅速,,5-7天即呈融合狀態(tài),細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,,平坦、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,,細(xì)胞核較大,呈橢圓形,,顏色淡,。細(xì)胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。近年來,,人們逐漸了解到非心肌細(xì)胞不僅對心肌細(xì)胞具有結(jié)構(gòu)上的支持、保護(hù)作用,,而且還具有自分泌和旁分泌功能,,影響心肌細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和生理功能;心肌成纖維細(xì)胞主要功能為對心肌細(xì)胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負(fù)責(zé)細(xì)胞基質(zhì)外的合成,,當(dāng)心肌損傷時(shí)能產(chǎn)生旁分泌生長因子,。心肌成纖維細(xì)胞是心臟結(jié)締組織中常見的細(xì)胞,可合成和分泌膠原纖維,、彈性纖維,、網(wǎng)狀纖維及有機(jī)基質(zhì),并且在外傷等因素刺激下,,部分纖維細(xì)胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細(xì)胞,,其功能活動(dòng)也得以恢復(fù),參與組織損傷后的修復(fù),。因此,,對心肌成纖維細(xì)胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個(gè)重點(diǎn)。
方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠心肌成纖維采用膠原酶-聯(lián)合消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠心肌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
兔血凝素樣氧化低密度脂蛋白受體1 英文名稱: Rabbit Lctin like oxLDL Receptor 1 規(guī)格: 英文縮寫: LOX-1
兔脂氧合酶同工酶 英文名稱: Rabbit Lipoxygenase Isozymes 規(guī)格: 英文縮寫: LOXI
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 1 英文名稱: Rabbit Maix Metalloproteinase 1 規(guī)格: 英文縮寫: MMP-1
兔基質(zhì)金屬蛋白酶 2 英文名稱: Rabbit Maix Metalloproteinase 2 規(guī)格: 英文縮寫: MMP-2
小鼠αN已?;咸擒彰?span>(αNAG)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat aquaporin 3 (AQP-3) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白3(AQP-3)試劑盒
Humanplacealactogen,HPLELISAKit 人胎盤催乳素(HPL)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanChromogranin,CgA試劑盒人嗜鉻蛋白A(CgA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
總脂肪酶(lipase)定量試劑盒50次
Humansalivaryductaoaibody,SDAELISAKit人抗唾液腺導(dǎo)管組織抗體(SDA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
肝腸鈣粘連蛋白重組兔單克隆抗體
生物鐘KAT13D蛋白抗體
CD63重組大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
CT (Calcitonin 0.5mgCT (Calcitonin ) 降鈣素(抗原)
FCER2重組人 CD23 / FCER2 蛋白 Protein
H1F0 Protein Human 重組人 H1F0 / Histone H1 蛋白
PCSK9 Protein Mouse 重組小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白
CT (Calcitonin 0.5mgCT (Calcitonin ) 降鈣素(抗原)
H1F0 Protein Human 重組人 H1F0 / Histone H1 蛋白
CD63重組大鼠 CD63 / Tspan-30 / Tetraspanin-30 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
PCSK9 Protein Mouse 重組小鼠 PCSK9 / NARC1 蛋白
FCER2重組人 CD23 / FCER2 蛋白 Protein
大鼠心肌成纖維細(xì)胞大鼠組蛋白H2A(H2A)試劑盒 ,英文名: H2A ELISA Kit
Mouse ai thyroglobulin aibody (ATGA/TGAB) ELISA Kit 小鼠抗甲狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)試劑盒
MouseIerleukin1receptoraagonist,IL-1raELISAkit 小鼠白介素1受體拮抗劑(IL1Ra)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanlymphocytefunctionassociatedaigen2,LFA-2ELISAKit人淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2
土壤元素?zé)晒舛吭噭┖?span>20次
ELISAKitdsDNA大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn),;
4,、長期培養(yǎng)時(shí),淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。