化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
視網(wǎng)膜組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細胞樣 | YS-01X7369 |
細胞簡介：
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮分離自視網(wǎng)膜組織,；視網(wǎng)膜居于眼球壁的內(nèi)層,，是一層透明的薄膜。視網(wǎng)膜由色素上皮層和視網(wǎng)膜感覺層組成,，兩層間在病理情況下可分開,，稱為視網(wǎng)膜脫離。色素上皮層與脈絡膜緊密相連,，由色素上皮細胞組成,，它們具有支持和營養(yǎng)光感受器細胞、遮光,、散熱以及再生和修復等作用,。組織學上視網(wǎng)膜分為10層，由外向內(nèi)分別為：色素上皮層,、視錐,、視桿細胞層、外界膜,、外顆粒層,、外叢狀層、內(nèi)顆粒層,、內(nèi)叢狀層,、神經(jīng)節(jié)細胞層、神經(jīng)纖維層,、內(nèi)界膜,。視網(wǎng)膜內(nèi)層為襯于血管膜內(nèi)面的一層薄膜，有感光作用,；后部鼻側有一視神經(jīng)乳頭,。視網(wǎng)膜上的感覺層是由三個神經(jīng)元組成,。神經(jīng)元是視細胞層，專司感光,，它包括錐細胞和桿細胞,。視桿細胞主要在離中心凹較遠的視網(wǎng)膜上，而視錐細胞則在中心凹處多,。層叫雙節(jié)細胞,，約有10到數(shù)百個視細胞通過雙節(jié)細胞與一個神經(jīng)節(jié)細胞相聯(lián)系,，負責聯(lián)絡作用,。第三層叫節(jié)細胞層，專管傳導,。視網(wǎng)膜是一層菲薄的但又非常復雜的結構,，它貼于眼球的后壁部，傳遞來自視網(wǎng)膜感受器沖動的神經(jīng)纖維跨越視網(wǎng)膜表面,，經(jīng)由視神經(jīng)到達出口,。視網(wǎng)膜的分辨力是不均勻的,，在黃斑區(qū),，其分辨能力強。它是組成血管腔面單層扁平上皮樣細胞,，它所產(chǎn)生和分泌的生物活性物質對維持血管張力,、調節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用,，在視網(wǎng)膜血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義,。由于從不同的組織和器官獲得的內(nèi)皮細胞具有不同的特性，在腦和視網(wǎng)膜中,，這些內(nèi)皮細胞具有內(nèi)屏障的功能,，在調節(jié)血管生理狀態(tài)，釋放血管活性物質以及新生血管的形成中發(fā)揮著重要作用,，體外分離培養(yǎng)RCEC對研究視網(wǎng)膜血管性疾病發(fā)生發(fā)展的病理生理機制以及疾病的早期防治具有重要臨床意義,。
方法簡介：
公司實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測：
公司實驗室分離的大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 內(nèi)皮細胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例,； 1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人脂多糖結合蛋白(LBP)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人過氧化酶(GSH-Px)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人(GSH)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人17-類固醇(17-KS)ELISAKit ELISA. 96T/48T
豚鼠表皮生長因子(EGF)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human cytovillin / Ezrin protein (cytovillin/ezrin) ELISA Kit 人細胞絨毛蛋白/埃茲蛋白(cytovillin/ezrin)試劑盒
HumanSS-A/RoaibodyELISAKit 人抗SS-A/Ro抗體試劑盒 96T/48T 進口分裝
HumanCyclin-dependekinase4,CDK-4試劑盒人周期素依賴性激酶4(CDK-4)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織GRK5激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit人抗多發(fā)性肌硬皮病抗體(PM-Scl/PM-1)試劑盒規(guī)格：96T/48T
蛋白酶體抑制劑亞基PI31抗體
鞘脂激活蛋白原抗體
ICOS重組小鼠 ICOS / AILIM / CD278 蛋白 (Fc 標簽) Protein
α2-巨球蛋白(α2M)重組蛋白 Recombinant Alpha-2-Macroglobulin (a2M)
HNRNPR重組人 HNRNPR / HNRNP-R / HNRNP R 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
CDH18 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CDH18 / Cadherin-18 蛋白
甘露糖受體C1樣蛋白1(MRC1)重組蛋白 Recombinant Mannose Receptor C Type 1 Like Protein 1(MRC1)
IL9 Protein Human 重組人 IL-9 / Interleukin-9 蛋白
AKT3重組小鼠 AKT3 蛋白 (aa 106-479, His & GST 標簽) Protein
FCGR2B Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD32b / FCGR2B 蛋白
CDH1重組人 E-Cadherin / CDH1 / E-cad / CD324 蛋白 (Fc 標簽) Protein
大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞人孕酮受體(PGR)ELISA 試劑盒
Human tumor vascular endothelial growth factor (TAF) ELISA Kit 人腫瘤血管生長因子(TAF)試劑盒
HumanBH3ieractingdomaindeathagonist,BidELISAKit 人BH3結構域凋亡誘導蛋白(Bid)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humaninsulin-likegrowthfactors2,IGF-2試劑盒人胰島素樣生長因子2(IGF-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
組織己糖激酶(HEXOKINASE)酶偶聯(lián)反應比色法定量試劑盒20次
HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫復合物(LDL-IC)試劑盒規(guī)格：96T/48T
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；
2、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L,；
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應將原代細胞換液；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；
2,、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),，進行分瓶試驗；
4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長,；
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。
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