詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
腦組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 雙極、多極形 | YS-01X7717 |
細(xì)胞簡介:
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體分離自腦皮層組織,;大腦分左右兩個半球,,大腦皮質(zhì)(灰質(zhì))覆蓋著每個大腦半球的大部分,它是神經(jīng)元胞體集中的地方,。內(nèi)部則是由神經(jīng)纖維或髓鞘構(gòu)成的白質(zhì),。少突膠質(zhì)細(xì)胞分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng),在銀浸染標(biāo)本中,,少突膠質(zhì)細(xì)胞比星狀膠質(zhì)細(xì)胞小,,其突起也較小而少,呈珠狀,故被稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞或寡突膠質(zhì)細(xì)胞,。少突膠質(zhì)細(xì)胞(oligodendrocyte)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的成髓鞘神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,,其發(fā)育要經(jīng)歷少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞、前少突膠質(zhì)細(xì)胞祖細(xì)胞,、未成熟和成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞等階段,。有學(xué)者將少突膠質(zhì)細(xì)胞按其發(fā)育程度和形態(tài)分為三型。但是,,細(xì)胞發(fā)育是一個連續(xù)的過程,,其形態(tài)、表達(dá)產(chǎn)物和功能的演變沒有嚴(yán)格的界限,,因此,,其分類是相對的。這三型分別為:Ⅰ型少突膠質(zhì)細(xì)胞又稱前O2A(pre-O2A progenitor cell),。細(xì)胞呈圓形,,表面光滑,直徑約3μm,,體外混合培養(yǎng)時成簇生長在星形膠質(zhì)表面,,具有很強(qiáng)的分裂增殖潛力,表達(dá)GM1,、波形蛋白和多唾液酸—神經(jīng)粘附分子(polysialic acid-neural cell adhesion molecule,,PSA-NCAM)等。Ⅱ型少突膠質(zhì)細(xì)胞胞體常有雙極或三極突起,,極少數(shù)為單極突起,,直徑約7μm,有一定的分裂增殖能力,。體外培養(yǎng)時為雙潛能細(xì)胞,,既可分化為少突膠質(zhì)細(xì)胞又可分化為Ⅱ型星形膠質(zhì),故又稱為少突膠質(zhì)細(xì)胞-Ⅱ型星形膠質(zhì)祖細(xì)胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor cell,,O2A),。O2A除表達(dá)GM1和波形蛋白外還表達(dá)GD3和GQ(淋巴雜交瘤株A2B5產(chǎn)生GQ的抗體),故常用A2B5抗體標(biāo)記O2A,。Ⅲ型少突膠質(zhì)細(xì)胞不再具有分裂增殖能力,,為分裂終期細(xì)胞。直徑約10μm,。根據(jù)其形成髓鞘的能力,,又分為不成熟的和成熟的兩類少突膠質(zhì)細(xì)胞。不成熟的OL胞體常伸出4~5條較粗大突起,,表面還殘留有A2B5標(biāo)記物,,同時也表達(dá)O1-O4抗原,,無形成髓鞘的能力。成熟的少突膠質(zhì)細(xì)胞突起有如蜘蛛網(wǎng),,大量表達(dá)半乳糖腦苷脂(galactocerebro side,,GC)、蛋白脂蛋白(proteio lipid protein,,PLP),、髓鞘堿性蛋白(myelin basic protein,MBP)等,,有對軸突髓鞘化的能力,。體外培養(yǎng)的少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞(簡稱少突膠質(zhì)細(xì)胞前體細(xì)胞)包括前O2A和O2A和未成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞,前兩者具有增殖能力,。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)采用消化,、混合細(xì)胞營養(yǎng)缺失培養(yǎng)、搖床振蕩結(jié)合差速貼壁法并通過專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體經(jīng)A2B5免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件 PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基 含B-27,、PDGF,、bFGF、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次,;
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 雙極,、多極形
傳代特性 不傳代,,不增殖,存活1-2周
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
人著絲粒蛋白B(CENPB)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CENPB (Cenomere Protein B) ELISA Kit
人中心體蛋白110(CEP110)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CEP110 (Cenosomal Protein 110kDa) ELISA Kit
人酶VB(CA5B)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CA5B (Carbonic Anhydrase VB, Mitochondrial) ELISA Kit
人絲切蛋白1(CFL1)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒 Human CFL1(Cofilin 1, Non-Muscle) ELISA Kit
豚鼠白介素4(IL4)試劑盒 ,,英文名: IL4 ELISA Kit
Human stem cell factor receptor (SCFR) ELISA Kit 人干細(xì)胞因子受體(SCFR)試劑盒
rabbitneuroophin3,-3ELISAKit 兔子神經(jīng)營養(yǎng)因子3(-3)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAVP(Humanargininevasopressin)ELISAKit人精加壓素
線粒體蛋白印跡電泳內(nèi)參蛋白抗體(1000倍)20微克
Rabbitai-neuophilgranulesaibody,ANGAELISAKit兔子抗中性粒細(xì)胞顆粒抗體(ANGA)試劑盒規(guī)格:96T/48T
ZYG11BL蛋白抗體
磷酸化原癌基因c-Raf抗體
FCAR重組大鼠 CD89 / FCAR 蛋白 Protein
HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病毒8抗原
EPOR重組人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein
IP6K1 Protein Human 重組人 IHPK1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
CA8 Protein Mouse 重組小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白
HHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P 0.5mgHHV8/ORF50(Human herpesvirus 8 type P) 人類皰疹病毒8抗原
IP6K1 Protein Human 重組人 IHPK1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
FCAR重組大鼠 CD89 / FCAR 蛋白 Protein
CA8 Protein Mouse 重組小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白
EPOR重組人 EPO Receptor / EPOR 蛋白 Protein
大鼠神經(jīng)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞兔兒茶酚胺(CA)ELISA 試劑盒
Human ypsinogen activation peptide (TAP) ELISA Kit 人原激活肽(TAP)試劑盒
Humanmorbillivirus,MVELISAKit 人麻疹病毒(MV)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanglathione,GSH試劑盒人(GSH)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織單胺氧化酶B型(MAO-B)活性熒光定量試劑盒20次
Humanmorbillivirus,MVELISAKit人麻疹病毒(MV)試劑盒規(guī)格:96T/48T
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長,;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行。