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產品名稱：大鼠破骨細胞

組織來源：骨髓

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 多核,、巨細胞

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠破骨分離自骨組織和骨髓,；破骨細胞是骨組織中的多核巨細胞,，位于骨組織表面的淺凹處。目前一般認為破骨細胞是分離自骨骼外的造血系統(tǒng),，其前體可能屬于造血干細胞的前單核細胞,。破骨細胞的主要功能是維持骨吸收和骨形成的相對平衡，若失去這種平衡則發(fā)生病理性變化,。因此多數學者從破骨細胞著手研究破骨細胞的結構,、功能探討骨吸收，形成相互平衡的機制,。但破骨細胞是一種終末分化細胞,，屬于不增殖細胞群,，不能增殖和傳代，只能進行原代培養(yǎng)且存活時間較短,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠破骨采用機械分離法/密度梯度離心法和骨髓單核細胞誘導法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠破骨經TRAP染色檢測,，純度可達30%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細胞如何處理,？

1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作