詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
睪丸組織 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 球形 | YS-01X7523 |
細胞簡介:
大鼠精原干分離自睪丸組織,;精原干細胞是位于睪丸生精小管的生精上皮內(nèi)的一群生精干細胞,是成體內(nèi)的定向干細胞,。精原干細胞的一些優(yōu)勢使其成為動物轉(zhuǎn)基因的理想宿主細胞,。精原干細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化等多項生命活動的調(diào)節(jié)機制的深入研究,,發(fā)生機理的進一步闡明以及精原干細胞轉(zhuǎn)染,異體,、異種移植技術(shù)的實際應(yīng)用,都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化,,以期得到較高產(chǎn)量和純度的有活力的精原細胞用于體外培養(yǎng)。在哺乳動睪丸內(nèi),,發(fā)生時一個受高度調(diào)控和持續(xù)的過程,,精原干細胞(SSCs)一方面進行自我更新維持干細胞數(shù)量,另一方面又不斷執(zhí)行分化成各級生精細胞直至最后生成,。精原干細胞定居在曲精細管上皮的基膜處,,是哺乳動物發(fā)生的最原始細胞,也是動物體內(nèi)一起能將遺傳信息傳遞的干細胞,。精原干細胞體外培養(yǎng)體系的建立,,在生物學(xué)、醫(yī)學(xué),、畜牧業(yè)生產(chǎn)及制備轉(zhuǎn)基因動物等領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景,。精原干細胞(SSCs)是生精上皮近基底膜的一群細胞,,具有自我更新能力和多向分化潛能,,是哺乳動物體內(nèi)能將遺傳信息傳遞給下一代的成體干細胞。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠精原干采用先機械吹打,、后消化,,結(jié)合Percoll密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠精原干經(jīng)CD44免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 懸浮
細胞形態(tài) 球形
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
?、?消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬Ⅲ型膠原(ColⅢ)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
豬Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
植物玉米素核苷(ZR)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
植物玉米素(Z)試劑盒 試劑盒 組裝/原裝
豬促生長激素釋放激素(GHRH)ELISA 試劑盒
Human macrophage inflammatory protein 1 alpha (MIP-1 alpha /CCL3) ELISA Kit 人巨噬細胞性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)試劑盒
PorcineDexamethasone,DexELISAKit 豬(Dex)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAlpha1Beta-GP(HumanAlpha1Betaglycoprotein)ELISAKit人α1β糖蛋白
血液0酸二酯酶3(PDE3)活性熒光定量試劑盒10次
MouseαN-acetylglucosaminidase,αNAGELISAKit小鼠αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)試劑盒
FRYL蛋白抗體
環(huán)指蛋白111抗體
IL8重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標簽) Protein
Ⅹ(F10)重組蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)
EFNA4重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 Protein
ALOX5AP Protein Human 重組人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 標簽)
HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)
Ⅹ(F10)重組蛋白 Recombinant Coagulation Factor X (F10)
ALOX5AP Protein Human 重組人 ALOX5AP / FLAP 蛋白 (His 標簽)
IL8重組人 IL-8 / CXCL8 蛋白 (aa 1-77, Fc 標簽) Protein
HA Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 蛋白 (His 標簽)
EFNA4重組人 Ephrin-A4 / EFNA4 蛋白 Protein
大鼠精原干細胞小鼠IgG Fc片段(IgGFcγ)試劑盒
Rat advanced glycation end products (AGEs) ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物(AGEs)試劑盒
HumahromboxaneB2,TX-B2ELISAKit 人血栓素B2(TXB2)試劑盒 進口分裝
HumanCollagenaseTypeII試劑盒人膠原酶II(CollagenaseII)試劑盒
組織ABL1激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
HumaeceptorⅢfoheFcregionofimmunoglobulinG,FcγRⅢELISAKitGFc段受體Ⅲ(FcγRⅢ/CD16)試劑盒
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂??;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2,、短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗,;
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。