大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞公司正在出售的產(chǎn)品：A型流感病毒H9N1血凝素型抗體 磷酸化卡波西氏肉瘤皰疹病毒潛伏核抗原相互作用蛋白1抗體 NKD2蛋白抗體 大鼠髖臼軟骨細胞 小鼠視網(wǎng)膜Muller細胞 FU97胃癌細胞I- COV434 (人卵巢顆粒腫瘤細胞)

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產(chǎn)品名稱：大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞

組織來源：結(jié)腸組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 上皮細胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠結(jié)腸黏膜上皮分離自結(jié)腸組織,；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸,，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸,、橫結(jié)腸,、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁,，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M",，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層,、固有層,、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織）,，肌層（內(nèi)環(huán)形,、外縱行兩層平滑肌）,，外膜（纖維膜或漿膜）,。腸黏膜上皮細胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障，持續(xù)暴露于大量抗原中,，也是機體面對病原微生物的道防線,。因此，腸黏膜上皮細胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外,，在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用。腸黏膜上皮細胞作為首先接觸抗原的細胞,，在黏膜免疫反應的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,，它決定黏膜免疫反應的發(fā)生、性質(zhì)和強度,。探討正常結(jié)腸黏膜上皮細胞的分離,、體外培養(yǎng)方法，為研究腸黏膜上皮細胞以及與腸黏膜相關(guān)疾病建立合適的細胞模型,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠結(jié)腸黏膜上皮采用先機械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的大鼠結(jié)腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理,？

1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。

4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

公司正在出售的產(chǎn)品：

脂肪型脂肪酸結(jié)合蛋白   英文名稱：   fatty acid-binding protein   規(guī)格：      英文縮寫：   FABP4

凋亡相關(guān)因子Fas/Apo-1   英文名稱：   apoptosis-inducing factor Fas/Apo-1   規(guī)格：      英文縮寫：   Fas/Apo-1

凋亡相關(guān)因子配體   英文名稱：   apoptosis-inducing factor ligand   規(guī)格：      英文縮寫：   Fas-L

凋亡相關(guān)因子配體   英文名稱：   apoptosis-inducing factor ligand   規(guī)格：      英文縮寫：   Fas-L

植物A(VA)ELISA 試劑盒

Human ai nuclear aibody (ANA) ELISA Kit 人抗核抗體(ANA)試劑盒

Porcineplateletactivatingfactor,PAFELISAKit 豬血小板活化因子(PAF)試劑盒 進口分裝

CLIAKitforaFGF-1(Humanacidicfibroblastgrowthfactor1)ELISAKit人酸性成纖維細胞生長因子1

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性熒光共振能量轉(zhuǎn)移法(FRET)定量試劑盒20次

MouseterminalcomplemecomplexC5b-9,TCCC5b-9ELISAKit小鼠末端補體復合物C5b-9(TCCC5b-9)試劑盒

FITC標記人CD64單克隆抗體

黑色素聚集激素/黑色素富集激素MCH抗體

PDCD1重組人 PD1 / PDCD1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

D受體(VDR)重組蛋白 Recombinant Vitamin D Receptor (VDR)

NRG3重組人 NRG-3 / Neuregulin-3 蛋白  Protein

ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His 標簽)

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)

D受體(VDR)重組蛋白 Recombinant Vitamin D Receptor (VDR)

ACVR1B Protein Human 重組人 ALK4 / ACVR1B 蛋白 (His 標簽)

PDCD1重組人 PD1 / PDCD1 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein

HA Protein H5N1 重組甲型流感 H5N1 (A/chicken/Egypt/2253-1/2006) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽)

NRG3重組人 NRG-3 / Neuregulin-3 蛋白  Protein

大鼠結(jié)腸黏膜上皮細胞小鼠αL巖藻糖苷酶(AFU)ELISA 試劑盒

Rat aquaporin 4 (AQP-4) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白4(AQP-4)試劑盒

Humanplacealprotein,PPELISAKit 人胎盤蛋白(PP)試劑盒 進口分裝

HumancicaicialPemphigoid,CP試劑盒人瘢痕性天皰瘡抗體(CP)試劑盒

組(leucine)含量比色法定量試劑盒20次

humanS100calciumbindingproteinA9/calgranulinB,S100A9ELISAKit人S100鈣結(jié)合蛋白A9/鈣粒蛋白B(S100A9)試劑盒