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詳細(xì)介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
眼角膜組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 內(nèi)皮細(xì)胞樣 | YS-01X7517 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
大鼠角膜內(nèi)皮分離自眼角膜組織；角膜位于眼球前壁的一層透明膜,，約占纖維膜的前1/6,，從后面看角膜呈正圓形，從前面看為橫橢圓形,。角膜厚度各部分不盡相同,，中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,，如有外物接觸角膜,，眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明,，角膜并沒有血管,，透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣,。角膜分為五層,，由前向后依次為：上皮細(xì)胞層、前彈力層,、基質(zhì)層,、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層,。角膜的高度透明性和光學(xué)性是正常發(fā)揮生理功能的必要條件之一,，而角膜內(nèi)皮細(xì)胞（CEC）在維持角膜的正常生理功能方面起重要作用。角膜內(nèi)皮細(xì)胞是角膜內(nèi)層的單層細(xì)胞,，構(gòu)成了后彈力層和房水之間的物理屏障,，通過離子“泵"功能調(diào)節(jié)角膜中離子濃度和水分，維持角膜的半脫水狀態(tài),，保證角膜的正常厚度和透明度,。一旦角膜內(nèi)皮細(xì)胞功能出現(xiàn)紊亂，常導(dǎo)致角膜水腫而使角膜部分甚至失去透明性,。角膜內(nèi)皮細(xì)胞主要功能有：①角膜是的無血管的組織,，具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,；②角膜內(nèi)皮細(xì)胞對(duì)角膜透明性有重要作用；③角膜內(nèi)皮細(xì)胞通過Na+-K+-ATP酶活性,，維持角膜和房水內(nèi)Na+梯度,，防止水分滲入角膜內(nèi)，維持角膜實(shí)質(zhì)層相對(duì)脫水狀態(tài),，維持透明性,。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；
2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,，至少為5×108細(xì)胞/L；
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,，漂浮,；
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液,；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；
2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,；
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進(jìn)行分瓶試驗(yàn),；
4,、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長(zhǎng)；
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。
方法簡(jiǎn)介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜內(nèi)皮采用混合膠原酶消化結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測(cè)：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜內(nèi)皮經(jīng)NSE（神經(jīng)元特異性烯醇化酶）免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件 PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
細(xì)胞傳代及凍存：
| 細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
| 如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
脂褐質(zhì)測(cè)試盒 Lipfuscin test box
脂蛋白（a）[LP（a）]測(cè)試盒 Lipoprotein (a) [LP (a)] test case
游離脂肪酸（NEFA）測(cè)試盒 Free fatty acid (NEFA) test case
脂肪酶測(cè)試盒 Lipase test kit
植物B6(VB6)ELISA 試劑盒
Human ai Toxoplasma IgM aibody (ai-tox IgM) ELISA Kit 人抗弓形體IgM抗體(ai-tox IgM)試劑盒
PorcineFibrinogen,FbgELISAKit 豬血纖蛋白原(Fbg)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAFP甲胎蛋白定性
血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶1(ACE1)活性比色法定量試劑盒20次
Mousethioredoxieductase,xRELISAKit小鼠硫氧還蛋白還原酶(xR)試劑盒
FBXW10蛋白抗體
核糖體蛋白S3抗體
TFPI重組人 TFPI 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
胰淀素(IAPP)重組蛋白 Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)
HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
ACVRL1 Protein Human 重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
M. VIRIDIFACIENS NA Protein M.viridifaciens 重組綠色小單孢菌 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標(biāo)簽)
胰淀素(IAPP)重組蛋白 Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)
ACVRL1 Protein Human 重組人 ALK-1 / ACVRL1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
TFPI重組人 TFPI 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
M. VIRIDIFACIENS NA Protein M.viridifaciens 重組綠色小單孢菌 神經(jīng)酸酶 (Neuraminidase / NA) (高活性) (His 標(biāo)簽)
HA重組甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
大鼠角膜內(nèi)皮細(xì)胞小鼠α半乳糖基抗體(Gal)ELISA 試劑盒
Rat aquaporin 2 (AQP-2) ELISA Kit 大鼠水通道蛋白2(AQP-2)試劑盒
Humanprogesteronereceptor,PGRELISAKit 人孕酮受體(PGR)試劑盒 進(jìn)口分裝
HumanChorionicGonadoophin,HCG試劑盒人絨毛膜(HCG)試劑盒
總微型RNA(miRNA)電泳法分離試劑盒20次
HumanSalmonellatyphiaigen,St-AgELISAKit人傷寒抗原(St-Ag)試劑盒
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