詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來(lái)源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號(hào) |
海綿體組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7606 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
大鼠海綿體平滑肌分離自海綿體組織,;海綿體,,又稱海綿體肌,,是最硬的平滑肌和結(jié)締組織。海綿體是一種勃起組織,,外面包有堅(jiān)厚的白膜,,內(nèi)部由結(jié)締組織和平滑肌組成海綿狀支架,其腔隙與血管相通,。它主要包括海綿體內(nèi)皮細(xì)胞,、平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞3種細(xì)胞成分。其中平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞鑲嵌于海綿體細(xì)胞外基質(zhì)的膠原中,,在消化海綿體組織時(shí),,膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細(xì)胞與基膜的聯(lián)系,破壞海綿體內(nèi)皮細(xì)胞間的緊密連接,。因此可用膠原酶分離出海綿體平滑肌細(xì)胞,。平滑肌,是非橫紋肌的肌肉組織,。分布在人體動(dòng)脈和靜脈血管壁,、膀胱,、子宮、男性和女性生殖道,、消化道,、呼吸道、眼睛的睫狀肌和虹膜,。平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后,,可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展,細(xì)胞形態(tài)大小不一,,呈梭形,、不規(guī)則形、三角形或扇形,,核卵圓形,、居中;2周后細(xì)胞匯合,,多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形,,胞漿豐富,有分枝狀突起,,細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng),,高低起伏;細(xì)胞密度低時(shí),,常交織成網(wǎng)狀,;密度高時(shí),則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快,,4-6天即可匯合,并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn),。
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4,、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),,淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長(zhǎng),;
5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。
方法簡(jiǎn)介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠海綿體平滑肌采用膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠海綿體平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳3-5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時(shí),,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化,,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
中文名稱 方法 規(guī)格
大鼠Ⅱ型膠原(ColⅡ)ELISAKit ELISA.
大鼠C(VC)ELISAKit ELISA.
大鼠B6(VB6)ELISAKit ELISA.
豬白介素1(IL-1)ELISA 試劑盒
Human ai SS-B/La aibody ELISA Kit 人抗SS-B/La抗體試劑盒
Porcineierleukin2,IL-2ELISAKit 豬白介素2(IL-2)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAhR(Humanarylhydrocarboeceptor)ELISAKit人芳香烴受體
血液牛病毒性腹瀉病毒(BovineViralDiarrhoeaVirus;BVDV)定性試劑盒20次
MouseTumornecrosisfactorβ,TNF-βELISAKit小鼠壞死因子β(TNF-β)試劑盒
B4GALT6抗體
富含亮重復(fù)蛋白8A抗體
OPCML重組小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
饑餓素-O-乙酰基轉(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)
IL12A & IL27B重組人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein
AIM2 Protein Human 重組人 AIM2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白
饑餓素-O-乙?;D(zhuǎn)移酶(GOAT)重組蛋白 Recombinant Ghrelin-O-Acyltransferase (GOAT)
AIM2 Protein Human 重組人 AIM2 蛋白 (GST 標(biāo)簽)
OPCML重組小鼠 OBCAM / OPCML 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
CX3CL1 Protein Canine 重組狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白
IL12A & IL27B重組人 IL12A & IL27B Heterodimer 蛋白 Protein
大鼠海綿體平滑肌細(xì)胞小鼠骨膠原交聯(lián)(Cr)ELISA 試劑盒
Rat annexin V (ANX- V) ELISA Kit 大鼠膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)試劑盒
Humansecretieceptor,SRELISAKit 人促胰液素/分泌素受體(SR)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanai-Reticulinaibody,ARA試劑盒人抗網(wǎng)硬蛋白抗體(ARA)試劑盒
植物細(xì)胞原生質(zhì)體電轉(zhuǎn)試劑盒10次
HumaumornecrosisfactorsolublereceptorⅡ,TNFsR-ⅡELISAKit人腫瘤壞死因子可溶性受體Ⅱ(TNFsR-Ⅱ)試劑盒