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產品名稱：大鼠骨髓樹突狀細胞(DC細胞)

組織來源：骨髓

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 半貼半懸浮

細胞形態(tài) 樹突狀

傳代特性 屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

細胞簡介：

大鼠骨髓樹突狀分離自骨髓,；骨髓是機體的造血組織，位于身體的許多骨骼內,。成年動物的骨髓分兩種：紅骨髓和黃骨髓。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用，白細胞能殺滅與抑制各種病原體,，包括細菌,、病毒等；某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,，骨髓不但是造血器官，它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質間的網眼中，是一種海綿狀的組織,，能產生血細胞的骨髓略呈紅色,，稱為紅骨髓。出生時，紅骨髓充滿全身骨髓腔,，隨著年齡增大,，脂肪細胞增多，相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,，最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓DC細胞是由骨髓單核細胞誘導而成的；DC細胞,，全稱樹突狀細胞(DC),，是近年來倍受們關注的專職抗原呈遞細胞(APC)，能攝取,、加工及呈遞抗原,，啟動T細胞介導的免疫反應。由美國學者Steinman于1973年在淋巴結中發(fā)現(xiàn),，從脾臟中分離出一類與粒細胞,、巨噬細胞和淋巴細胞形態(tài)和功都不同的白細胞，因其細胞膜向外伸出,，形成與神經細胞軸突相似的膜性樹狀突起,，故而命名為樹突狀細胞。未成熟DC具有較強的遷移能力,，成熟DC能有效激活初始型T細胞,，處于啟動、調控,、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié),。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠骨髓DC采用密度梯度離心法分離骨髓單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠骨髓樹突狀細胞(DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
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收到細胞如何處理,？

1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。

2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作