詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X7417 |
細胞簡介:
大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)分離自骨髓,;骨髓是機體的造血組織,,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,,包括細菌、病毒等,;某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,骨髓不但是造血器官,,它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,,是一種海綿狀的組織,,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓,。出生時,,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,,脂肪細胞增多,,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓基質(zhì)系統(tǒng)內(nèi)存在的骨髓間充質(zhì)干細胞是一種除造血干細胞以外的,、具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞,可以向骨,、軟骨,、肌組織、皮膚,、脂肪,、神經(jīng)等多種組織分化,因此可以作為組織工程中的種子細胞,。在骨髓中,,BMSC占骨髓有核細胞總數(shù)的0.001%-0.1%,,含量極低。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養(yǎng)條件要求較高,,在培養(yǎng)過程中,,受貼壁時間、種植密度,、血清含量,、培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)基pH值等條件的影響。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長,;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠骨髓間充質(zhì)干采用沖洗骨髓,、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠骨髓間充質(zhì)干經(jīng)CD90免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態(tài) 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右,;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
植物銅鋅超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)測試盒(比色法)
乙酰(ACH)測定試劑盒(測血清)(微板法)
總蛋白定量測定試劑盒(帶標準:BCA法)(微板法)
總蛋白(TP)測定試劑盒(帶標準:雙縮脲法)
植物油菜素甾醇(BR)ELISA 試劑盒
Human ai rubella virus IgM aibody (ai-RV IgM) ELISA Kit 人抗風疹病毒IgM抗體(ai-RV IgM)試劑盒
Porcinesolublevascuolarcelladhesionmolecules1,sVCAM-1ELISAKit 豬可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAFU(Mousealpha-L-fucosidase)ELISAKit小鼠αL巖藻糖苷酶
血液糖原化學水解比色法定量試劑盒20次
MouseThyroxineaibody,TAbELISAKit小鼠甲狀腺素抗體(TAb)試劑盒
8號染色體開放閱讀框58抗體
凋亡相關(guān)蛋白3抗體
SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
CK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原 0.5mgCK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原
BCL6重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽) Protein
ADK Protein Human 重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽)
FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽)
CK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原 0.5mgCK14/17/42/10 peptide 細胞角蛋白14抗原
ADK Protein Human 重組人 ADK 蛋白 (His & GST 標簽)
SELL重組小鼠 CD62L / L-Selectin / SELL 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
FCGR4 Protein Mouse 重組小鼠 CD16-2 / FCGR4 蛋白 (His 標簽)
BCL6重組人 BCL6 / B-cell CLL lymphoma 6 蛋白 (aa 1-150, His & Trx 標簽) Protein
大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞小鼠抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)ELISA 試劑盒
Rat aithrombin III (AT- III) aibody ELISA Kit 大鼠抗Ⅲ抗體(AT-Ⅲ)試劑盒
HumanOpacity-associatedproteins,OPAsELISAKit 人不透光相關(guān)蛋白(OPAs)試劑盒 進口分裝
HumanAngiotensinconveingenzyme,ACE試劑盒人血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)試劑盒
植物高質(zhì)化線粒體分離試劑盒10次
Humanβ-siteAPP-CleavingEnzyme1,,1BACE1ELISAKit人β位淀粉樣前體蛋白裂解酶1(BACE1)試劑盒