詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
鞏膜組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7744 |
細(xì)胞簡介:
大鼠鞏膜成纖維分離自鞏膜組織,,鞏膜是眼球壁的主要組成之一,。是眼球纖維膜的后5/6部分。前方聯(lián)接角膜,,后方與視神經(jīng)的鞘膜延續(xù),。鞏膜在視神經(jīng)穿出部附近最厚,愈前愈薄,,在肌腱附著處又復(fù)增厚,。其與角膜交界處,外面有環(huán)形的角膜溝,,深部有鞏膜靜脈竇,。小兒的鞏膜為淺藍色,成年為白色,,老年因脂肪沉著而帶黃色,。鞏膜結(jié)構(gòu)堅韌,有支持和保護眼內(nèi)組織的作用,。成纖維細(xì)胞是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分,,由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來;成纖維細(xì)胞較大,,輪廓清楚,,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯,。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛,細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,,在一定條件下,它可以實現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,;成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好,,懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,,表現(xiàn)為小的突起;6h后細(xì)胞基本貼壁,,伸展成梭形,,胞核清晰,分布較均勻,,散在生長,,不聚集成團,;細(xì)胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態(tài),,細(xì)胞排列緊密,,有的交叉重疊生長,平坦,、胞體較大,,細(xì)胞質(zhì)透明,細(xì)胞核較大,,呈橢圓形,,顏色淡。細(xì)胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
方法簡介:
公司實驗室分離的大鼠鞏膜成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實驗室分離的大鼠鞏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
包被條件 貼壁不包被
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳2-3代左右
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,95%,;CO2,,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
植物血凝素(PHA)ELISAKit ELISA.
植物生長激素(GH)ELISAKit ELISA.
植物凝脂酸(PA)ELISAKit ELISA.
植物吲哚乙酸(IAA)ELISAKit ELISA.
豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA 試劑盒
Human single sanded DNA aibody / denatured DNA aibody (ssDNA) ELISA Kit 人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)試劑盒
PorcineIerferonγ,IFN-γELISAKit 豬γ干擾素(IFN-γ)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAg-NORs(HumanArgyrophilicnucleolarorganizerregionproteins)ELISAKit人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白
血液乳酸脫氫酶(LDH)總活性酶動力比色法定量試劑盒20次
MouseansformingGrowthfactorβ1,TGF-β1ELISAKit小鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGF-β1)試劑盒
1號染色體開放閱讀框50抗體
蛋腺苷轉(zhuǎn)移酶抗體
CNTF重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
己糖激酶1(HK1)重組蛋白 Recombinant Hexokinase 1 (HK1)
ECD重組人 ECD / Ecdysoneless homolog 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白
IL5 Protein Canine 重組狗 IL5 蛋白 (His 標(biāo)簽)
己糖激酶1(HK1)重組蛋白 Recombinant Hexokinase 1 (HK1)
AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白
CNTF重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
IL5 Protein Canine 重組狗 IL5 蛋白 (His 標(biāo)簽)
ECD重組人 ECD / Ecdysoneless homolog 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
大鼠鞏膜成纖維細(xì)胞小鼠顆粒酶B(Gzms-B)ELISA 試劑盒
Rat ai IVIgG aibody ELISA Kit 大鼠抗IVIgG抗體試劑盒
HumanGlycatedAlbumin,GAELISAKit 人糖化白蛋白(GA)試劑盒 進口分裝
Humanalpha-fetoproteinLensculinarisaggliin3,AFP-L3試劑盒人小扁結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)試劑盒
植物半胱(cysteine)含量比色法定量試劑盒20次
Mouse15-lipoxygenase,15-LO/LOXELISAKit小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)試劑盒
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長,;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進行。