大鼠鞏膜成纖維細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠鞏膜成纖維分離自鞏膜組織，鞏膜是眼球壁的主要組成之一,。是眼球纖維膜的后5/6部分,。前方聯(lián)接角膜，后方與視神經的鞘膜延續(xù),。鞏膜在視神經穿出部附近最厚,，愈前愈薄，在肌腱附著處又復增厚,。其與角膜交界處,，外面有環(huán)形的角膜溝，深部有鞏膜靜脈竇,。小兒的鞏膜為淺藍色,，成年為白色，老年因脂肪沉著而帶黃色,。鞏膜結構堅韌,，有支持和保護眼內組織的作用,。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來,；成纖維細胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,，細胞質嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下,，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的成纖維細胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團,；細胞生長迅速,，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長,，平坦、胞體較大,，細胞質透明,，細胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細胞融合，并彼此連接成網狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠鞏膜成纖維采用混合膠原酶消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠鞏膜成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

包被條件 貼壁不包被

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳2-3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。

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己糖激酶1(HK1)重組蛋白 Recombinant Hexokinase 1 (HK1)

AGER Protein Human 重組人 AGER / RAGE 蛋白

CNTF重組小鼠 CNTF / Ciliary Neurotrophic Factor 蛋白 (His 標簽) Protein

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原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；

　　2、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L,；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4,、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>

　　7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,，應將原代細胞換液；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液,。

　　二,、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,；

　　2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內，進行分瓶試驗,；

　　4,、長期培養(yǎng)時，淋巴細胞中要加入生長因子,，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長；

　　5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。