詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
肝臟組織 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細(xì)胞樣 | YS-01X7166 |
細(xì)胞簡介:
大鼠肝星形分離自肝臟組織,;肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個器官,并在身體里面起著去氧化,、儲存肝糖,、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用;肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里最大的器官,,位于機(jī)體中的腹部位置,在右側(cè)橫隔膜之下,,位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方,,胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,,為一紅棕色的V字形器官,。肝臟是尿素合成的主要器官,又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu):肝臟位于右上腹,,隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面,大部分肝為肋弓所復(fù)蓋,,僅在腹上區(qū),、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,肝上面則與膈及腹前壁相接,。肝星形細(xì)胞(HSC)又名肝貯脂細(xì)胞,、維生素A貯存細(xì)胞、竇周細(xì)胞,、Ito細(xì)胞等,,是肝臟細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源。HSC在激活后可進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞,,各種可導(dǎo)致肝纖維化的因素均將HSC作為最終靶細(xì)胞,。正常情況下,HSC處于靜止?fàn)顟B(tài),,當(dāng)肝臟發(fā)生炎癥反應(yīng)或受到機(jī)械刺激等損傷時,,HSC的表型由靜止型轉(zhuǎn)變?yōu)榧せ钚停せ畹?span>HSC可通過增生和分泌細(xì)胞外基質(zhì)參與肝纖維化的形成及肝內(nèi)結(jié)構(gòu)的重建,,此過程也是肝纖維化的中心環(huán)節(jié),。肝星形細(xì)胞分布于肝臟的Disse間隙內(nèi),是合成,、分泌細(xì)胞外基質(zhì)的主要來源,,在肝纖維化的發(fā)生中處于最重要地位,。肝星形細(xì)胞是肝臟的間充質(zhì)細(xì)胞,約占肝臟細(xì)胞總數(shù)的8%-13%,。作為肝臟合成細(xì)胞外基質(zhì)的主要細(xì)胞群,,肝星形細(xì)胞不僅能分泌蛋白多糖、糖蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,,合成一定量的膠原酶以維持正常的基底膜結(jié)構(gòu),,還能通過其突起的收縮參與肝竇的微循環(huán)調(diào)節(jié)。此外,,肝星形細(xì)胞能通過合成肝細(xì)胞生長因子,、胰島素樣生長因子、表皮生長因子等促進(jìn)肝細(xì)胞增殖和肝再生,。
方法簡介:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝星形采用混合酶灌流消化,、低速離心、密度梯度離心制備而來,,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠肝星狀經(jīng)α-SMA、Desmin免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬白介素1β(IL-1β)ELISAKit ELISA.
豬白介素18(IL-18)ELISAKit ELISA.
中文名稱 方法 規(guī)格
豬白血病抑制因子受體(LIFR)ELISAKit ELISA.
豬端粒酶(TE)ELISA 試劑盒
Human metallothionein (MT) ELISA Kit 人金屬硫蛋白(MT)試劑盒
PorcineBcl-2AssaciatedXprotein,BAXELISAKit 豬Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)試劑盒 進(jìn)口分裝
CLIAKitforAlpha2-AP(MouseAlpha2-Aiplasmin)ELISAKit小鼠α2抗纖溶酶
血液(lithium)酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量試劑盒20次
Nasoniaviipennisvitellogenin,VtgELISAKit蝶蛹金小蜂卵黃蛋白原(vtg)試劑盒
13號染色體開放閱讀框12抗體
促腎上腺皮質(zhì)激素ACTH(18-39)抗體
CD2重組大鼠 CD2 蛋白 Protein
Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1 0.5mgFut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 階段特異性胚胎表面抗原-1抗原
PARK7重組人 PARK7 / DJ-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B2/A1) Heterotrimer 蛋白
ICAM2 Protein Mouse 重組小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白
Fut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1 0.5mgFut4/CD15/SSEA-1(Stage-specific embryonic surface antigen 1) 階段特異性胚胎表面抗原-1抗原
AMPK Protein Human 重組人 AMPK (G1/B2/A1) Heterotrimer 蛋白
CD2重組大鼠 CD2 蛋白 Protein
ICAM2 Protein Mouse 重組小鼠 ICAM-2 / CD102 蛋白
PARK7重組人 PARK7 / DJ-1 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein
大鼠肝星狀細(xì)胞小鼠狂犬病毒抗原(RV/PRV-Ag)試劑盒
Rat a disiegrin and metalloproteinase 8 (ADAM8) ELISA Kit 大鼠解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)試劑盒
Huma-Hglycoprotein,THPELISAKit 人TH糖蛋白(THP)試劑盒 進(jìn)口分裝
Humanadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1A試劑盒人能a1A受體(ADRA1A)試劑盒
植物F型氫ATP酶(H+-ATPase)活性比色法定量試劑盒20次
MouseActivinA,ACV-AELISAKit小鼠活化素A(ACV-A)試劑盒
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細(xì)胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行;
3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗(yàn);
4,、長期培養(yǎng)時,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,,以利細(xì)胞生長;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行,。