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產品名稱：大鼠肝枯否細胞

組織來源：肝臟組織

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 梭形,、巨噬細胞

傳代特性 屬于終末分化細胞；屬于不增殖細胞群

消化液 試劑盒因（12mM）

培養(yǎng)條件 氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

細胞簡介：

大鼠枯否分離自肝臟組織,；肝臟是身體內以代謝功能為主的一個器官,，并在身體里面起著去氧化、儲存肝糖、分泌性蛋白質的合成等作用,；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁,。肝臟是機體內臟里最大的器官，位于機體中的腹部位置,，在右側橫隔膜之下,，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方,。肝臟是機體消化系統(tǒng)中最大的消化腺,，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官,，又是新陳代謝的重要器官,。肝臟在機體位置和形態(tài)結構：肝臟位于右上腹，隱藏在右側膈下和肋骨深面,，大部分肝為肋弓所復蓋,，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁,，肝上面則與膈及腹前壁相接,。枯否氏細胞(Kupffer細胞)是肝臟的肝血竇內一些固定于竇壁的巨噬細胞,，它能吞噬和清除大部分從腸道來的抗原微粒,，并能吞噬和清除肝血竇中的細菌、異物和衰老的紅細胞,，并把血紅蛋白分解成,。此外，肝巨噬細胞也有處理抗原,，誘導T細胞增殖,，參與免疫調節(jié)的作用?？莘袷霞毎鸵话憔奘杉毎煌?，枯否氏細胞不具有增加抗原免疫原性的能力，相反有消除或減弱抗原性的作用,?？莘袷霞毎芡淌蓙碜匝貉h(huán)的抗原抗體復合物和其他有害物質，以消除這些物質對機體的損害,?？莘窦毎δ苷系K可導致腸源性內毒素血癥。電鏡下有很多皺褶和微絨毛,。

方法簡介：

公司實驗室分離的大鼠肝枯否采用混合酶灌流消化,、低速離心,、密度梯度離心,、差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

公司實驗室分離的大鼠肝枯否經CD68免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理,？

1,、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現象。若有,，請拍照,，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細胞形態(tài),、所用基礎培養(yǎng)基、血清比例,、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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