詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形 | YS-01X8233 |
細胞簡介:
大鼠骨髓造血干分離自骨髓;骨髓是機體的造血組織,,位于身體的許多骨骼內(nèi),。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細胞、血小板和各種白細胞,。血小板有止血作用,,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,包括細菌,、病毒等;某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,,骨髓不但是造血器官,它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨,、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,是一種海綿狀的組織,,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,,稱為紅骨髓。出生時,,紅骨髓充滿全身骨髓腔,,隨著年齡增大,脂肪細胞增多,,相當部分紅骨髓被黃骨髓取代,,最后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓。造血干細胞具有自我更新能力并能分化為各種血細胞的前提細胞,,最終生成各種血細胞成分,,包括紅細胞,白細胞和血小板,。造血干細胞需要根據(jù)機體的生理需求適時的補充血液系統(tǒng)各個成熟細胞組分,。同時在損傷、炎癥等應(yīng)激狀態(tài)下,,造血干細胞也扮演著調(diào)節(jié)和維持體內(nèi)血液系統(tǒng)各個細胞組分的生理平衡的角色,。臨床治療中,造血干細胞移植廣泛應(yīng)用于血液系統(tǒng)疾病以及自身免疫疾病,,在其它實體瘤的治療中,,比如淋巴瘤,生殖細胞瘤,,乳腺癌,,小細胞肺癌,主要應(yīng)用于常規(guī)治療失敗或復發(fā)難治以及具有不良預后因素的患者,。造血干細胞以不對稱有絲分裂方式進行增殖,,一個干細胞分裂產(chǎn)生兩個子細胞,一個分化為造血祖細胞,另一個則保持干細胞特征,。造血干細胞在不斷體外培養(yǎng)產(chǎn)生大量造血祖細胞同時,,保持自己既不增殖也不分化。體外培養(yǎng)微環(huán)境合適,,造血干細胞可持續(xù)維持培養(yǎng) 60 天左右,。 造血干細胞體外增殖培養(yǎng)需要基質(zhì)細胞滋養(yǎng)(滋養(yǎng)層細胞),缺少滋養(yǎng)層細胞不增殖,,無法長期培養(yǎng),,本產(chǎn)品為收集培養(yǎng)好的造血干懸浮細胞灌裝發(fā)貨,不包含滋養(yǎng)層,,因此收貨后建議盡快實驗,。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂浮,;
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細胞換液,;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠骨髓造血干采用沖洗骨髓、密度梯度離心,、差速貼壁法結(jié)合培養(yǎng)基篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的大鼠骨髓造血經(jīng)CD34免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、EGF,、bFGF,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態(tài):圓形
傳代特性:不建議傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
大鼠骨髓造血干體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
?、芷鞴倥囵B(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
三乙酸 100g
ichloroaceticAcid 500g
N-三(羥甲基)甲基甘酸 500g
icine 100g
豚鼠免疫球蛋白G(IgG)試劑盒 ,英文名: IgG ELISA Kit
Human low density lipoprotein receptor (LDLR) ELISA Kit 人低密度脂蛋白受體(LDLR)試劑盒
MonkeyhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISAKit 猴超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforBigETELISAKit大鼠大內(nèi)皮素
細菌尿素酶(UREASE)活性化學發(fā)光法定量試劑盒20次
rabbitleukemiainhibitoryfactorreceptor,LIFRELISAKit兔子白血病抑制因子受體(LIFR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
半胱脫硫酶NFS1抗體
淋巴細胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒Z蛋白抗體
TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein
OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)
SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標簽) Protein
IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標簽)
SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標簽)
OXR (Orexin receptor 0.5mgOXR (Orexin receptor) 食欲素受體(多肽)
IL17RB Protein Human 重組人 IL17BR / IL17RB / IL-17 Receptor B 蛋白 (Fc 標簽)
TNF重組雪貂 TNF-alpha / TNFA 蛋白 Protein
SERPINA1A Protein Mouse 重組小鼠 Alpha 1 Antitrypsin / SerpinA1a 蛋白 (Fc 標簽)
SERPINB2重組人 SerpinB2 / PAI-2 蛋白 (GST 標簽) Protein
大鼠骨髓造血干細胞大鼠白細胞介素1α(IL-1α)試劑盒 ,,英文名: IL-1α ELISA Kit
Lens culinaris agglinin (LCA) ELISA Kit 扁豆凝集素(LCA)試劑盒
Mousegrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumanNon-PhosphorylatedInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1ELISAKit人未0酸化類胰島素生長因子結(jié)合蛋白-1
同位素真菌/酵母細胞蛋白核酸結(jié)合凝膠遷移電泳分析試劑盒20次
ELISAKitsICAM-1大鼠可溶性細胞間粘附分子1