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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
產(chǎn)品名稱：大鼠腎臟微血管內(nèi)皮細(xì)胞
組織來源：腎
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、EGF、bFGF,、IGF,、VEGF、Heparin,、Hydrocortisone,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
大鼠腎臟微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。
細(xì)胞簡介：
大鼠腎臟微血管內(nèi)皮分離自腎臟；腎臟是大鼠的重要器官,，它的基本功能是生成尿液,，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,，同時經(jīng)重吸收功能保留水分及其他有用物質(zhì),，如葡萄糖、蛋白質(zhì),、氨基酸,、鈉離子、鉀離子,、等,，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡,。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素,、活性維生素D3,、前列腺素、激肽等,，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官,。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,，使新陳代謝得以正常進(jìn)行,。腎臟內(nèi)部的結(jié)構(gòu)，可分為腎實質(zhì)和腎盂兩部分,。在腎縱切面可以看到,，腎實質(zhì)分內(nèi)外兩層：外層為皮質(zhì)，內(nèi)層為髓質(zhì),。腎皮質(zhì)位于腎實質(zhì)表層,，富含血管，新鮮時呈紅褐色,，由一百多萬個腎單位組成,。每個腎單位由腎小體和腎小管所構(gòu)成，部分皮質(zhì)伸展至髓質(zhì)錐體間,，成為腎柱,。腎髓質(zhì)位于腎皮質(zhì)的深面，血管較少，色淡紅,，為10-20個錐體所構(gòu)成,。腎錐體在切面上呈三角形。錐體底部向腎凸面,，向腎門,，錐體主要組織為集合管,，錐體稱腎乳頭,，每一個乳頭有10-20個乳頭管，向腎小盞漏斗部開口,。在腎竇內(nèi)有腎小盞,，為漏斗形的膜狀小管，圍繞腎乳頭,。腎錐體與腎小盞相連接,。每腎有7-8個腎小盞，相鄰2-3個腎小盞合成一個腎大盞,。每腎有2-3個腎大盞,，腎大盞匯合成扁漏斗狀的腎盂。腎盂出腎門后逐漸縮窄變細(xì),，移行為輸尿管,。腎單位是腎臟結(jié)構(gòu)和功能的基本單位。腎小體包括腎小球和腎小囊,。腎小體內(nèi)有一個毛細(xì)血管團(tuán),，稱為腎小球，腎小球是個血管球,。它由腎動脈分支形成,。腎小球外有腎小囊包繞。腎小囊分兩層,，兩層之間有囊腔與腎小管的管腔相通,。腎小管匯成集合管。若干集合管匯合成乳頭管,，尿液由此流入腎小盞,。微血管又稱毛細(xì)血管。分布于各種組織和細(xì)胞間的最微細(xì)的血管,。介于微動脈和微靜脈之間,。平均直徑7-9微米，數(shù)量極多,，成網(wǎng)狀分布,。管壁由一層內(nèi)皮細(xì)胞及一薄層基膜組成，厚約0.5微米?；ね饷嬗斜咏Y(jié)締組織,，其中有纖維細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和周細(xì)胞等,。最細(xì)的毛細(xì)血管由一個內(nèi)皮細(xì)胞圍成管腔,，較粗的毛細(xì)血管由2-3個內(nèi)皮細(xì)胞圍成。分布于肌肉組織,、神經(jīng)組織和結(jié)締組織中的毛細(xì)血管,，內(nèi)皮細(xì)胞間為縫隙連接（縫隙寬150埃），稱連續(xù)毛細(xì)血管,；分布于內(nèi)分泌腺,、腎臟等處的毛細(xì)血管，除有縫隙連接外,，細(xì)胞本身有許多小孔,，（孔徑800-1000埃），稱有孔毛細(xì)血管,；分布于肝,、脾、骨髓及某些內(nèi)分泌腺的毛細(xì)血管,，管腔擴(kuò)大,，稱血竇。毛細(xì)血管的管壁薄,、通透性大,、管徑細(xì)（8-10微米）、數(shù)量多,、血流速度慢,，這些特點使其成為血液與組織液進(jìn)行物質(zhì)交換的場所，又稱交換血管,。血竇（sinusoid）由毛細(xì)血管管腔擴(kuò)大而成,，竇壁的一般結(jié)構(gòu)與毛細(xì)血管壁相同，由單層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成,，內(nèi)皮細(xì)胞膜上有窗孔,。不同器官的竇壁結(jié)構(gòu)各有差別。脾血竇的內(nèi)皮細(xì)胞間有較寬裂隙,；肝血竇內(nèi)皮細(xì)胞是不連續(xù)的,，有較寬的細(xì)胞隙（0.1-0.5微米）；肝,、脾血竇的基膜不完整或無基膜,，通透性比毛細(xì)血管大,，較大的蛋白質(zhì)和血細(xì)胞可以通過。肝血竇壁內(nèi)有枯否細(xì)胞,，脾血竇內(nèi)外有巨噬細(xì)胞,，這兩種細(xì)胞都有吞噬能力，可吞噬清除血液中的異物,、細(xì)菌等有害物質(zhì),，是機(jī)體單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的重要組成分。某些內(nèi)分泌腺的血竇有連續(xù)的基膜,。
方法簡介：
實驗室分離的大鼠腎臟微血管內(nèi)皮采用膠原酶消化,，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的大鼠腎臟微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一,、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二,、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）,、對于貼壁細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細(xì)胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細(xì)胞如何處理,？
1、首先,，觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細(xì)胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
3,、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,，了解細(xì)胞相關(guān)信息,，如貼壁特性（貼壁/懸浮）,、細(xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢,、拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)）,；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,，預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細(xì)胞：將細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi)，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細(xì)胞密度超過80%，可將細(xì)胞懸液分至2個細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),，補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml,；若細(xì)胞密度未超過80%，將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時再進(jìn)行傳代操作
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