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產品名稱：大鼠眼動脈平滑肌細胞

組織來源：眼動脈

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

包被條件：

培養(yǎng)基：基礎培養(yǎng)基,，含FBS、EGF,、bFGF,、Insulin、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠眼動脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞簡介：

眼動脈是眼眶及內容物最主要的血液供應，是頸內動脈主要分枝,，也是交通顱內外血管的重要通道,。有研究結果認為，絕大多數(shù)眼動脈起源于ICA剛出海綿竇處,，且多數(shù)起源于ICA床突上段內上壁,，少數(shù)起源于上壁，少數(shù)眼動脈可起源于ICA海綿竇段及腦膜中動脈,。眼動脈的走行分為顱內段,、管內段及眶內段，眼動脈在管內段一般行走于視神經(jīng)上方,，顱內段和眶內段再分為五段：1,、短臂；2,、A角,；3,、長臂；4,、B角,；5、遠側部,。眼動脈進入眶內后沿視神經(jīng)向下外側走行,，終止于眶孔的上內側角。眼動脈的分枝一般分為眼組,、眶組及眶外組,。眼組分為視網(wǎng)膜中央動脈睫前動脈及眼球的脈絡叢；眶組分為淚腺動脈和肌動脈,；眶外組分為篩后動脈,、篩前動脈、眶上動脈,、瞼內側動脈,、鼻背動脈(終末枝)。眼動脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后,，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一，呈梭形,、不規(guī)則形,、三角形或扇形，核卵圓形,、居中,；2周后細胞匯合，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富,，有分枝狀突起，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏,；細胞密度低時，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點。眼動脈供應整個眼球,、眼球附屬器及部分附近組織的營養(yǎng),。眼動脈可發(fā)生痙攣,、血栓、栓塞及出血等,，均可嚴重影響視力,。頸內動脈眼動脈瘤簡稱眼動脈瘤，又稱床突旁動脈瘤或頸內動脈腹側動脈瘤,。眼動脈瘤是位于眼動脈和后交通動脈之間的動脈瘤,，占全部顱內動脈瘤的0.47%～9.26%，30%～70%患者表現(xiàn)為SAH,，1/3有視功能損傷,，如視力減退、視野缺損和視神經(jīng)等,。體外培養(yǎng)的眼動脈平滑肌細胞對于研究其生理功能,、藥物作用以及各種致病因素作用下的病理生理改變具重要意義。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠眼動脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠眼動脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。

a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。

b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起,，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

收到細胞如何處理,？

1,、首先，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,，請拍照,，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。

5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松,。

6、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

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