大鼠羊膜間充質干細胞

商品屬性：

細胞簡介：

大鼠羊膜間充質干分離自胎盤羊膜組織；胎盤（placenta）是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內膜聯(lián)合長成的母子間交換物質的過渡性器官,，由羊膜,、葉狀絨毛膜和底蛻膜構成。胎兒在子宮中發(fā)育,，依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),，而雙方保持相當的獨立性。胎盤還產生多種維持妊娠的激素,，是一個重要的內分泌器官,。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長出一些輔助結構如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結合,，以達到母子間物質的交換,，這樣的結構稱假胎盤。羊膜是胎盤的最內層,，與眼結膜組織結構相似,，含有眼表上皮細胞，包括結膜細胞和角膜上皮細胞生長所需要的物質,，其光滑,，無血管,、神經及淋巴,，具有一定的彈性；在電鏡下,，其分為五層：上皮層,、基底膜、致密層,、纖維母細胞層和海綿層,，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ,、Ⅲ,、Ⅳ、Ⅴ,、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白,、層粘連蛋白等成份。羊膜細胞主要由羊膜上皮細胞和羊膜間充質細胞組成,，均具有多分化潛能,，可轉化為神經元，且還有合成,、釋放生物活性物質和神經營養(yǎng)因子的功能,。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；

　　2,、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L；

　　3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>

　　7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,，應將原代細胞換液；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,，應將細胞懸液經低速離心后換液。

　　二,、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2,、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,，進行分瓶試驗；

　　4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長,；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。

方法簡介：

實驗室分離的大鼠羊膜間充質干采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的大鼠羊膜間充質經CD44免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%

大鼠羊膜間充質干體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。

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