詳細(xì)介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細(xì)胞形態(tài) | 貨號 |
直腸 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 上皮細(xì)胞樣 | YS-01X8274 |
細(xì)胞簡介:
大鼠直腸黏膜上皮分離自直腸組織,;直腸為大腸的未段,位于小骨盆內(nèi),。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸,沿骶骨和尾骨的前面下行,穿過盆膈,,下端以門而終,。直腸上端的大小似結(jié)腸,,其下端擴(kuò)大成直腸壺腹,是糞便排出前的暫存部位,,最下端變細(xì)接管,。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切,與骶椎有相同的曲度,。直腸周圍多脂肪,、無縱帶,位于膀胱和生殖器官的背側(cè),。直腸的動脈血供主要是來自腸系膜下動脈的直腸上動脈,,來自髂內(nèi)動脈的直腸中動脈和來自髂內(nèi)動脈的直腸下動脈。腸黏膜上皮細(xì)胞是機體內(nèi)外環(huán)境的重要屏障,,持續(xù)暴露于大量抗原中,,也是機體面對病原微生物的第一道防線。因此,,腸黏膜上皮細(xì)胞除有吸收,、分泌和轉(zhuǎn)運等重要生理功能之外,在黏膜先天性和獲得性免疫防御機制中也起著重要作用,。腸黏膜上皮細(xì)胞作為首先接觸抗原的細(xì)胞,,在黏膜免疫反應(yīng)的起始階段發(fā)揮關(guān)鍵作用,它決定黏膜免疫反應(yīng)的發(fā)生,、性質(zhì)和強度,。
方法簡介:
實驗室分離的大鼠直腸黏膜上皮采用先機械分離法,、后膠原酶消化法并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的大鼠直腸黏膜上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
大鼠直腸黏膜上皮體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的優(yōu)良培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞傳代及凍存:
細(xì)胞傳代步驟 | 細(xì)胞凍存步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細(xì)胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細(xì)胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細(xì)胞,,如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
突觸核蛋白 英文名稱: Human α Synucleinα 規(guī)格: 英文縮寫: α-SYN
血清鐵蛋白 英文名稱: ferritin in serum 規(guī)格: 英文縮寫: SF
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A 英文名稱: Pulmonary surfacta associated protein type A 規(guī)格: 英文縮寫: SP-A
β-谷甾醇 英文名稱: β Sitosterol 規(guī)格: 英文縮寫: β Sitosterol
小鼠17羥孕酮(17-OHP)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat plasminogen activator inhibitor 1 (PAI-1) ELISA Kit 大鼠纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI-1)試劑盒
HumanIsoprenalineHydrochloride,iso-HydELISAKit 人異(iso-Hyd)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanCoisol試劑盒人(Coisol)試劑盒規(guī)格:96T/48T
組織C-KIT激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
HumanproteinkinaseB,PKBELISAKit人蛋白激酶B(PKB)試劑盒規(guī)格:96T/48T
DZANK1蛋白抗體
親環(huán)蛋白(親環(huán)素)40抗體
NTRK2重組狗 TrkB / NTRK2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白)(抗原)
SEMA6A重組人 Semaphorin 6A / SEMA6A 蛋白 Protein
IFNA8 Protein Human 重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白
IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白
Nestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白 0.5mgNestin 巢蛋白(神經(jīng)上皮干細(xì)胞蛋白)(抗原)
IFNA8 Protein Human 重組人 Interferon alpha-B / IFNA8 蛋白
NTRK2重組狗 TrkB / NTRK2 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
IL12B Protein Mouse 重組小鼠 IL12B / IL-12B 蛋白
SEMA6A重組人 Semaphorin 6A / SEMA6A 蛋白 Protein
大鼠直腸黏膜上皮細(xì)胞大鼠白介素2(IL-2)試劑盒 ,英文名: IL-2 ELISA Kit
Mouse 6 galactose sulfatase (Gal-6S) ELISA Kit 小鼠半乳糖6酯酶(Gal-6S)試劑盒
ELISA 小鼠可溶性白介素-2受體(mouse sIL-2R) 進(jìn)口分裝
CLIAKitforIL-6(HumanIerleukin6)ELISAKIT人白介素6
通用型肌酐(CREATININE)酶連續(xù)反應(yīng)比色法定量試劑盒50次
ELISAKitICA大鼠胰島細(xì)胞抗體
原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細(xì)胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細(xì)胞換液,;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細(xì)胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,;
3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進(jìn)行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長,;
5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時才能進(jìn)行