詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
鼻黏膜 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8318 |
細胞簡介:
兔鼻黏膜成纖維分離自鼻黏膜組織,;黏膜是覆蓋在機體內(nèi)消化、呼吸,、泌尿,、生殖等器官管腔內(nèi)壁的一層組織結構,由上皮組織和疏松結締組織構成,。根據(jù)部位不同,,有口腔黏膜、胃腸黏膜,、鼻腔黏膜,、氣管黏膜、陰道黏膜,、眼瞼黏膜等不同名稱,。它們的結構也因功能、部位不一而不盡相同,。鼻腔黏膜,,簡稱鼻黏膜,,覆蓋于鼻腔表面,黏膜下方為軟骨,、骨或骨骼肌,。成纖維細胞是結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來,。成纖維細胞較大,,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,,其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,,細胞質(zhì)嗜弱堿性,,具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,在一定條件下,,它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉化,;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用,。剛分離的成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁,,其中部分開始伸出偽足,表現(xiàn)為小的突起,;6h后細胞基本貼壁,,伸展成梭形,胞核清晰,,分布較均勻,,散在生長,,不聚集成團,;細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,,平坦,、胞體較大,細胞質(zhì)透明,,細胞核較大,,呈橢圓形,顏色淡,。細胞融合,,并彼此連接成網(wǎng)狀,;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性,;
2,、細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L,;
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng);
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂??;
7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應將原代細胞換液,;
8、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。
二、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,;
2、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行,;
3、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗,;
4、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。
方法簡介:
實驗室分離的兔鼻黏膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法,并通過成纖維細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔鼻黏膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔鼻黏膜成纖維體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
② 消化培養(yǎng)法
?、?懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞、淋巴細胞,、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,可采用低速離心分離,,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品:
豬抗受體(A)ELISAKit ELISA.
中文名稱 方法 規(guī)格
豬組胺(HIS)ELISAKit ELISA.
豬雌二醇(E2)ELISAKit ELISA.
豬0酸化細胞外信號調(diào)節(jié)激酶(pERK)ELISA 試劑盒
Human basic fibroblast growth factor 4 (bFGF-4) ELISA Kit 人堿性成纖維細胞生長因子4(bFGF-4)試劑盒
PorcineTissue-typePlasiminogenActilyse,t-PAELISAKit 豬組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)試劑盒 進口分裝
CLIAKitforAmAC-1ELISAKit大鼠巨噬細胞替代激活相關化學因子1
血液過氧化氫(HYDROGENPEROXIDE)活性比色法定量試劑盒20次
Porcineacetylcholine,ACHELISAKit豬乙酰(ACh)試劑盒
PE標記人CD83單克隆抗體
微管蛋白抗體
HA重組甲型流感 H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein
PADI4 (HL-60 PAD 0.5mgPADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV,,PADI 4,,PAD I4 ) 關節(jié)相關基因
CDH5重組人 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-710, His & GST 標簽)
ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白
PADI4 (HL-60 PAD 0.5mgPADI4 (HL-60 PAD)(Protein-arginine deiminase type IV,PADI 4,,PAD I4 ) 關節(jié)相關基因
APP Protein Human 重組人 Beta-amyloid 39 / Beta-APP39 蛋白 (aa 672-710, His & GST 標簽)
HA重組甲型流感 H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白 (His 標簽) Protein
ACVR2A Protein Human 重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白
CDH5重組人 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
兔鼻黏膜成纖維細胞大鼠β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)試劑盒 ,,英文名: β-TG ELISA Kit
Rabbit soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit 兔子可溶性血管細胞粘附分子1(sVCAM-1)試劑盒
ELISA 小鼠核轉錄因子(mouse NF-kB ) 進口分裝
CLIAKitforIL-16ELISAKIT大鼠白介素16
通用型馬傳染性貧血(EquineInfectiousAnemia;EIA)試劑盒20次
ELISAKitANG-R-Tie2大鼠血管生成素受體Tie2