兔腸道干細胞

商品屬性：

細胞簡介：

兔腸道干分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管,。腸是消化管中長的一段,，也是功能重要的一段。哺乳動物的腸包括小腸,、大腸和直腸3大段,。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進行的,，大腸主要濃縮食物殘渣,，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外,。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化,、吸收食物,，以提供足夠的養(yǎng)分,，其實它的功能還遠不止此——它還是機體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng),。腸道干細胞（ISC）也稱腸道上皮干細胞,，主要位于腸黏膜隱窩內(nèi),，其與腸道黏膜上皮的更新和修復密切相關(guān)。正常情況下,，位于隱窩基底部的腸道干細胞不斷向隱窩頂部（腸腔方向）遷移，整個遷移過程大約3-5d,，在遷移過程中腸道干細胞分化形成不同的腸黏膜細胞。當受到外界生理或病理信號作用時,，ISC可持續(xù)增殖、分化為成熟腸上皮細胞,，如腸型細胞、杯狀細胞,、內(nèi)分泌細胞和潘氏細胞等，從而維持腸道黏膜結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定性,。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；

　　2,、細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L,；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4,、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂浮；

　　7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應將原代細胞換液,；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。

　　二、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞,；

　　2、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi)，進行分瓶試驗,；

　　4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長；

　　5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行,。

方法簡介：

實驗室分離的兔腸道干采用-膠原酶聯(lián)合消化后,，用腸道干細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實驗室分離的兔腸道經(jīng)MSI-1免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：懸浮

細胞形態(tài)：球形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2,，5%

兔腸道干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。

　?、?消化培養(yǎng)法

　　③ 懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

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