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參考價(jià)	￥1-￥6200	/件

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
貨號	YS-01X8340	主要用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：MRVI1蛋白抗體 FAM83A蛋白抗體 NCI-H2023人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 NADPH氧化酶活化蛋白1抗體 HLF人肝癌細(xì)胞原鈣粘蛋白γA8抗體 SAS舌頭鱗狀腫瘤細(xì)胞大鼠腓腸肌細(xì)胞

詳細(xì)介紹

兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞

兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞

商品屬性：

組織來源	產(chǎn)品規(guī)格	細(xì)胞形態(tài)	貨號
肺靜脈	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶	成纖維細(xì)胞樣	YS-01X8340

細(xì)胞簡介：

兔肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個(gè)靜脈里流動脈血的血管。左右1對，共4條,，兩條連接右肺，兩條連接左肺,。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接,，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位。肺靜脈淤血性肺動脈高壓,，是由于肺靜脈內(nèi)血液淤滯而引起的肺動脈高壓,。正常情況下，肺循環(huán)具有血壓低,、阻力小和順應(yīng)性大的特點(diǎn),，肺動脈壓力高低取決于單位時(shí)間內(nèi)肺動脈血流量和肺血管的阻力，要維持肺循環(huán)的低壓,、低阻的狀態(tài)，必須保證整個(gè)肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻,，血液順利地由肺動脈經(jīng)毛細(xì)血管進(jìn)入肺靜脈,，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進(jìn)入體循環(huán),，才能避免肺動脈內(nèi)壓力升高,。肺大靜脈平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展,，細(xì)胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中,；2周后細(xì)胞匯合,，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí),，常交織成網(wǎng)狀,；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細(xì)胞生長較快,，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn),。該細(xì)胞參與血管壁炎癥反應(yīng),，保持靜脈管腔的通暢，還是多數(shù)動脈疾病的靶細(xì)胞,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；

　　2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,，至少為5×108細(xì)胞/L,；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4,、胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>

　　7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；

　　2、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),，進(jìn)行分瓶試驗(yàn),；

　　4、長期培養(yǎng)時(shí),，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清，以利細(xì)胞生長,；

　　5,、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次；

　　6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快,、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細(xì)菌、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔肺大靜脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存：

細(xì)胞傳代步驟

細(xì)胞凍存步驟

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

兔肺大靜脈平滑肌細(xì)胞