兔肺大靜脈平滑肌細胞

商品屬性：

細胞簡介：

兔肺大靜脈平滑肌分離自肺大靜脈組織,；肺大靜脈在用肺呼吸的脊椎動物中,，把動脈血由肺送回心臟的靜脈，是一個靜脈里流動脈血的血管,。左右1對,，共4條，兩條連接右肺,，兩條連接左肺,。肺靜脈異位引流是指肺靜脈未能直接與左心房連接，而與右心房或體靜脈系統(tǒng)連接的先天性心血管異位,。肺靜脈淤血性肺動脈高壓,，是由于肺靜脈內血液淤滯而引起的肺動脈高壓。正常情況下,，肺循環(huán)具有血壓低,、阻力小和順應性大的特點，肺動脈壓力高低取決于單位時間內肺動脈血流量和肺血管的阻力,，要維持肺循環(huán)的低壓,、低阻的狀態(tài)，必須保證整個肺循環(huán)系統(tǒng)的暢通無阻,，血液順利地由肺動脈經(jīng)毛細血管進入肺靜脈,，再入左心室，經(jīng)過左心室收縮進入體循環(huán),，才能避免肺動脈內壓力升高,。肺大靜脈平滑肌細胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細胞貼壁伸展,，細胞形態(tài)大小不一,，呈梭形、不規(guī)則形,、三角形或扇形,，核卵圓形、居中；2周后細胞匯合,，多數(shù)細胞伸展呈長梭形,，胞漿豐富，有分枝狀突起,，細胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長,，高低起伏；細胞密度低時,，常交織成網(wǎng)狀；密度高時,，則排列為旋渦狀或柵欄狀,。傳代后細胞生長較快，4-6天即可匯合,，并保持上述形態(tài)學特征和生長特點,。該細胞參與血管壁炎癥反應，保持靜脈管腔的通暢,，還是多數(shù)動脈疾病的靶細胞,。

原代細胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；

　　2,、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L；

　　3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4、 胎牛血清濃度為10%-80%

　　5,、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂??；

　　7、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應將原代細胞換液,；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時，應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二,、懸浮細胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；

　　2,、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；

　　3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,，進行分瓶試驗；

　　4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長,；

　　5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行,。

方法簡介：

實驗室分離的兔肺大靜脈平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結合差速貼壁法制備而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測：

實驗室分離的兔肺大靜脈平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細胞形態(tài)：成纖維細胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔肺大靜脈平滑肌體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞傳代及凍存：

原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中，瓶壁可預先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細胞培養(yǎng)法

　　對于懸浮生長的細胞，如白血病細胞,、淋巴細胞,、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。

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