詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
骨髓 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形 | YS-01X8355 |
細胞簡介:
兔骨髓單個核分離自骨髓,;骨髓是機體的造血組織,,位于身體的許多骨骼內(nèi)。成年動物的骨髓分兩種:紅骨髓和黃骨髓,。紅骨髓能制造紅細胞,、血小板和各種白細胞。血小板有止血作用,,白細胞能殺滅與抑制各種病原體,,包括細菌、病毒等,;某些淋巴細胞能制造抗體,。因此,骨髓不但是造血器官,,它還是重要的免疫器官,。骨髓是存在于長骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨質(zhì)間的網(wǎng)眼中,,是一種海綿狀的組織,,能產(chǎn)生血細胞的骨髓略呈紅色,稱為紅骨髓,。出生時,,紅骨髓充滿全身骨髓腔,隨著年齡增大,,脂肪細胞增多,,相當(dāng)部分紅骨髓被黃骨髓取代,后幾乎只有扁平骨骨髓腔中有紅骨髓,。骨髓單個核細胞是骨髓中具有單個核的細胞,包括淋巴細胞和單核細胞,。注意這里是(mononuclear cell)單個核細胞,,而不是(Monocyte)單核細胞。單個核細胞的體積,、形態(tài)和比重與骨髓其他細胞不同,,利用一定比例聚蔗糖和鈉形成的等滲溶液作密度梯度離心,使一定密度的細胞按相應(yīng)密度梯度分布,,可將各種血細胞與單個核細胞分離,。
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1,、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,,應(yīng)將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,,應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,,以利細胞生長,;
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。
方法簡介:
實驗室分離的兔骨髓單個核采用取骨髓,、通過密度梯度離心法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔骨髓單個核經(jīng)過檢測,,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔骨髓單個核體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,,可使用血球計數(shù)板計數(shù),。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,,注意凍存管做好標(biāo)識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
小鼠受體()ELISAKit ELISA
小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISAKit ELISA
小鼠0酸肌醇3激酶(PI3K)ELISAKit ELISA
小鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISAKit ELISA
EB病毒核抗原-3A抗體
谷受體亞基δ2/GluR-δ2抗體
PLAT重組小鼠 tPA / PLAT 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein
蛋白Z(PROZ)重組蛋白 Recombinant Protein Z (PROZ)
EPDR1重組人 EPDR1 蛋白 Protein
COQ7 Protein Human 重組人 COQ7 蛋白
IL6 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 IL6 / Interleukin-6 蛋白
ABCA1(ATP binding cassette transporter A1 0.5mgABCA1(ATP binding cassette transporter A1) 腺苷三0酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1抗原
COQ7 Protein Human 重組人 COQ7 蛋白
CCL6重組小鼠 CCL6 / C-C motif ligand 6 蛋白 Protein
GDNF Protein Rat 重組大鼠 GDNF 蛋白
PDGFRA重組人 PDGFRa / CD140a 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
小鼠乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)ELISA pcr檢測試劑盒
Human visceral adipose specific serine protease inhibitor (vaspin) ELISA Kit 人內(nèi)臟脂肪特異性絲蛋白酶抑制劑(vaspin)試劑盒
Humanpan-cytokeratin,P-CKELISAKit 人廣譜細胞角蛋白(P-CK)pcr檢測試劑盒分裝
GuineapigGrowthhormone,GH試劑盒豚鼠生長激素(GH)試劑盒規(guī)格:96T/48T
真菌/酵母酸性0酸酶總活性比色法定量試劑盒20次
Mousec-fosELISAKit小鼠c-fos試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔骨髓單個核細胞大鼠皮敵菌素(DCD)試劑盒 ,英文名: DCD ELISA Kit
Mouse thrombus precursor protein (TpP) ELISA Kit 小鼠血栓前體蛋白(TpP)試劑盒
Rat5-Hydroxyyptamine,5HTELISAKit 大鼠5羥色胺(5-HT)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforGp49a(Humanglycoprotein49A)ELISAKit人糖蛋白49A
細胞丁酰酯酶活性比色法定量試劑盒20次
Ratthyroopin-releasinghormone,HELISAKit大鼠促甲狀腺素釋放激素(H)試劑盒規(guī)格:96T/48T