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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
產(chǎn)品名稱：兔海綿體內(nèi)皮細胞
組織來源：海綿體
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml）,，明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：內(nèi)皮細胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔海綿體內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介：
兔海綿體內(nèi)皮分離自海綿體組織,；陰莖海綿體是由海綿狀的小梁和腔隙構(gòu)成的血竇結(jié)構(gòu)，它主要包括海綿體內(nèi)皮細胞,、平滑肌細胞和成纖維細胞3種細胞成分,。其中平滑肌細胞和成纖維細胞鑲嵌于海綿體細胞外基質(zhì)的膠原中，而海綿體內(nèi)皮細胞則覆蓋于海綿體血竇的腔面,，僅占海綿體組織的2.8%,。在消化海綿體組織時，膠原酶的作用主要是松解海綿體內(nèi)皮細胞與基膜的聯(lián)系,，破壞海綿體內(nèi)皮細胞間的緊密連接,。如果消化時間延長或膠原酶濃度過大，平滑肌細胞和成纖維細胞也將被消化下來,，從而影響海綿體內(nèi)皮細胞的純度,。因此，比較篩選合適的膠原酶濃度和消化時間是成功分離海綿體內(nèi)皮細胞的關(guān)鍵,。
方法簡介：
實驗室分離的兔海綿體內(nèi)皮采用混合酶消化法結(jié)合機械分離法,、并用內(nèi)皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔海綿體內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng),。
a）、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
收到細胞如何處理,？
1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,。若有,，請拍照，并及時與技術(shù)支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關(guān)信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%，可正常傳代,；若未超過80%,，移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,，瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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