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本網(wǎng)站銷售的化學(xué)產(chǎn)品僅供科學(xué)研究或工業(yè)應(yīng)用,,不直接用于食品,、藥品、臨床或動(dòng)物的診斷或治療!
產(chǎn)品名稱:兔口腔上皮細(xì)胞
組織來(lái)源:口腔黏膜
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:鼠尾膠原Ⅰ(2-5μg/cm2)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長(zhǎng)添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性:貼壁
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔口腔上皮體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),,以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細(xì)胞簡(jiǎn)介:
兔口腔上皮分離自口腔黏膜組織,;口腔上皮細(xì)胞是一種上皮細(xì)胞,,呈扁平、多邊形,,形狀不規(guī)則,。口腔各壁都有黏膜覆蓋,,口腔上皮細(xì)胞主要分布在口腔兩側(cè)頰部,。上皮的垂直切面上,細(xì)胞形狀不一,。緊靠基膜的一層基底細(xì)胞為矮柱狀,,為具有增殖分化能力的干細(xì)胞,部分子細(xì)胞向淺層移動(dòng),?;讓右陨鲜菙?shù)層多邊形細(xì)胞,再上為幾層梭形或扁平細(xì)胞,。僅靠近表面幾層細(xì)胞為扁平狀,,基底層細(xì)胞能不斷分裂增生,以補(bǔ)充表層衰老或損傷脫落的細(xì)胞,。復(fù)層扁平上皮深層的結(jié)締組織內(nèi)有豐富的毛細(xì)血管,,有利于復(fù)層扁平上皮的營(yíng)養(yǎng)。
方法簡(jiǎn)介:
實(shí)驗(yàn)室分離的兔口腔上皮先消化,、后-膠原酶混合消化法制備而來(lái),,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè):
實(shí)驗(yàn)室分離的兔口腔上皮經(jīng)Cytokeratin-18免疫熒光鑒定,,純度可達(dá)90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體,、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補(bǔ)加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過(guò)夜,。第二天換液并檢查細(xì)胞密度,。
二、細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。
a)、對(duì)于貼壁細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細(xì)胞,,脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液,,將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對(duì)于懸浮細(xì)胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細(xì)胞懸起,,將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
收到細(xì)胞如何處理,?
1,、首先,觀察細(xì)胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請(qǐng)拍照,,并及時(shí)與技術(shù)支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細(xì)胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題,,部分貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細(xì)胞置于細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時(shí),,以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài),。
3、仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書,,了解細(xì)胞相關(guān)信息,,如貼壁特性(貼壁/懸浮),、細(xì)胞形態(tài),、所用基礎(chǔ)培養(yǎng)基、血清比例,、所需細(xì)胞因子,、傳代比例、換液頻率等,。
4,、靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,,鏡檢,、拍照,記錄細(xì)胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù)),;建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)。
5,、貼壁細(xì)胞:若細(xì)胞生長(zhǎng)密度超過(guò)80%,,可正常傳代,;若未超過(guò)80%,,移除細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng)基,預(yù)留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右再進(jìn)行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細(xì)胞:將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無(wú)菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細(xì)胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時(shí),,若細(xì)胞密度超過(guò)80%,,可將細(xì)胞懸液分至2個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)培養(yǎng),補(bǔ)加培養(yǎng)基至5ml,;若細(xì)胞密度未超過(guò)80%,,將細(xì)胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),直至細(xì)胞密度達(dá)80%左右時(shí)再進(jìn)行傳代操作
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