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詳細介紹
商品屬性：
組織來源 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
卵巢 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 成纖維細胞樣 | YS-01X8385 |
細胞簡介：
兔卵巢成纖維分離自卵巢組織,；卵巢是雌性動物的生殖器官,，卵巢的功能是產(chǎn)生卵以及類固醇激素,。卵巢的位置與睪丸相同，僅左側(cè)發(fā)育（右側(cè)已退化）,，呈葡萄狀,，均為處于不同發(fā)育時期的卵泡，卵泡呈黃色,，卵巢表面密布血管,。卵巢的大小與年齡和產(chǎn)卵期有關(guān)。大多數(shù)脊椎動物有兩個卵巢,，但是部分魚類的兩個卵巢融合為單個結(jié)構(gòu),，而所有鳥類只有左側(cè)卵巢有機能。卵巢是位于子宮兩側(cè)的一對卵圓形的生殖器官,，它的外表有一層上皮組織,，其下方有薄層的結(jié)締組織。卵巢的內(nèi)部結(jié)構(gòu)可分為皮質(zhì)和髓質(zhì),。皮質(zhì)位于卵巢的周圍部分,，主要由卵泡和結(jié)締組織構(gòu)成；髓質(zhì)位于中央,，由疏松結(jié)締組織構(gòu)成,，其中有許多血管、淋巴管和神經(jīng),。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細胞成分,，由胚胎時期的間充質(zhì)細胞分化而來；成纖維細胞較大,，輪廓清楚,，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯,。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動,，在一定條件下，它可以實現(xiàn)跟纖維細胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細胞對不同程度的細胞變性,、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的卵巢成纖維細胞呈圓形,、折光性良好,，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足,，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細胞基本貼壁，伸展成梭形,，胞核清晰,，分布較均勻，散在生長,，不聚集成團,；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細胞質(zhì)透明，細胞核較大,，呈橢圓形,，顏色淡。細胞融合,，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。卵巢成纖維細胞大多分布于卵巢表面,，其主要特點和功能：①成纖維細胞在體外易于培養(yǎng),；②卵巢損傷后，成纖維細胞能修復(fù)和重塑卵巢,；③能在卵巢炎癥時有效控制炎癥擴散,。
方法簡介：
實驗室分離的兔卵巢成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測：
實驗室分離的兔卵巢成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達90%以上，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳5代左右,；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%；CO2,，5%
兔卵巢成纖維體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞傳代及凍存：
| 細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
| 如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,，可進行細胞凍存,。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時,，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,，如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,，可采用低速離心分離，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性，可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系,、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)ELISAKit ELISA
小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶A(MMP-2/GelatinaseA)ELISAKit ELISA
小鼠腺嘌呤二核苷酸0酸(NADPH)ELISAKit ELISA
瓜酸 ELISA
G蛋白偶聯(lián)受體109A抗體
環(huán)指蛋白89
ST6GALNAC2重組小鼠 STHM / ST6GALNAC2 蛋白 Protein
胞外5'-核苷酸酶(NT5E)重組蛋白 Recombinant 5'-Nucleotidase, Ecto (NT5E)
EBAG9重組人 RCAS1 / EBAG9 蛋白 Protein
CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)
CD53 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD53 蛋白 (aa 107-181, F僀?僀
Alpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase 0.5mgAlpha-AF/ Alpha-Afa(alpha-L-arabinofuranosidase) α-L-阿拉伯呋喃糖苷酶抗原
CXCL1 Protein Human 重組人 CXCL1 / MGSA / NAP-3 蛋白 (His & SUMO 標簽)
SLAMF8重組小鼠 SLAMF8 / BLAME 蛋白 Protein
BST1 Protein Rat 重組大鼠 CD157 / BST1 蛋白
AGER重組人 AGER / RAGE 蛋白 Protein
小鼠卵泡抑素(FS)ELISA pcr檢測試劑盒
Rat collagenase II (Collagenase II) ELISA Kit 大鼠膠原酶II(Collagenase II)試劑盒
HumanPerforin/Pore-formingprotein,PF/PFPELISAKit 人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)pcr檢測試劑盒分裝
HumanActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAM試劑盒人白細胞活化黏附因子(ALCAM)試劑盒規(guī)格：96T/48T
脂質(zhì)過氧化物4-羥基壬烯酸(4-HNE)ELISA定量測定試劑盒48/96次
Mouseangiotensinogen,aGTELISAKit小鼠血管緊張素原(aGT)試劑盒規(guī)格：96T/48T
兔卵巢成纖維細胞大鼠內(nèi)皮素受體A(EA)試劑盒 ,，英文名： EA ELISA Kit
Mouse platelet factor 3 (PF-3) ELISA Kit 小鼠血小板因子3(PF-3)試劑盒
RatGlycogenphosphorylaseBB,GP-BBELISAKit 大鼠糖原0酸化酶同工酶BB(GP-BB)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforGIP(MouseGlucose-dependeinsulin-releasingpolypeptide)ELISAKit小鼠葡萄糖依賴性胰島素釋放多肽
細胞脯肽酶(prolidase;PLD)克林納(Chinard)比色法定量試劑盒20次
RatsolubleToll-likereceptor2,sTLR-2ELISAKit大鼠可溶性Toll樣受體2(sTLR2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
原代細胞的培養(yǎng)條件：
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；
2、細胞接種時濃度要稍大一些,，至少為5×108細胞/L,；
3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)；
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應(yīng)將原代細胞換液；
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,，應(yīng)將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞；
2,、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行；
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),，進行分瓶試驗；
4,、長期培養(yǎng)時,，淋巴細胞中要加入生長因子，白血病細胞中要加入少量的原患者血清,，以利細胞生長,；
5、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行
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