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參考價(jià)	￥1-￥6200	/套

產(chǎn)品簡介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×105cells/T25
貨號(hào)	YS-01X8404	主要用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

兔胚肺成纖維細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：鋅指蛋白699抗體 P5C還原酶2抗體 HuH-7 (人肝癌細(xì)胞) 大鼠前列腺上皮細(xì)胞 kyse30人食道癌細(xì)胞大鼠主動(dòng)脈外膜成纖維細(xì)胞 Caki-2 (人乳頭狀腎細(xì)胞癌細(xì)胞) 小鼠支氣管上皮細(xì)胞

詳細(xì)介紹

兔胚肺成纖維細(xì)胞

兔胚肺成纖維細(xì)胞

商品屬性：

組織來源	產(chǎn)品規(guī)格	細(xì)胞形態(tài)	貨號(hào)
胚胎,；肺	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶	成纖維細(xì)胞樣	YS-01X8404

細(xì)胞簡介：

兔胚肺成纖維分離自胚肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官,，位于胸腔,，左右各一，覆蓋于心之上,。肺有分葉,，左二右三,，共五葉。肺經(jīng)肺系（指氣管,、支氣管等）與喉,、鼻相連，故稱喉為肺之門戶,，鼻為肺之外竅,。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時(shí)期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來,。成纖維細(xì)胞較大,，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu),，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形,，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動(dòng)旺盛,，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性,，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動(dòng)，在一定條件下,，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化,；成纖維細(xì)胞對(duì)不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用,。剛分離的胚肺成纖維細(xì)胞呈圓形,、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中,。30min細(xì)胞貼壁,，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起,；6h后細(xì)胞基本貼壁,，伸展成梭形，胞核清晰,，分布較均勻,，散在生長，不聚集成團(tuán),；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài),，細(xì)胞排列緊密,，有的交叉重疊生長，平坦,、胞體較大,，細(xì)胞質(zhì)透明,，細(xì)胞核較大，呈橢圓形,，顏色淡,。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀,；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布,。細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。該細(xì)胞在合成和分泌細(xì)胞因子,、維持血管內(nèi)外和凝血和纖溶的的動(dòng)態(tài)平衡中起重要作用,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1,、細(xì)胞要通過充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性；

　　2,、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,，至少為5×108細(xì)胞/L；

　　3,、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4、胎牛血清濃度為10%-80%

　　5,、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6、在起始的2天中盡量減少振蕩,，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,，漂浮,；

　　7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀，應(yīng)將原代細(xì)胞換液,；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí)，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液,。

　　二,、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；

　　2,、短期培養(yǎng)，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行；

　　3,、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),，進(jìn)行分瓶試驗(yàn)；

　　4,、長期培養(yǎng)時(shí),，淋巴細(xì)胞中要加入生長因子，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長,；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。

方法簡介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胚肺成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來,，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔胚肺成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔胚肺成纖維體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

兔胚肺成纖維細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存：

細(xì)胞傳代步驟

細(xì)胞凍存步驟

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái),，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出,，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存,。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后,，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化,，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中,，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,，以利于組織塊粘著于瓶壁，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長,。

　?、?消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，如白血病細(xì)胞,、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無需消化,，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng)，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng),。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

兔胚肺成纖維細(xì)胞