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產(chǎn)品名稱:兔胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞
組織來源:胎盤
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
包被條件:PLL(0.1mg/ml)
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):梭形,、多角形
傳代特性:可傳1-2代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%;CO2,,5%
兔胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介:
兔胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層分離自胎盤組織,;胎盤(placenta)是哺乳動物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長成的母子間交換物質(zhì)的過渡性器官,,由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成,。胎兒在子宮中發(fā)育,,依靠胎盤從母體取得營養(yǎng),而雙方保持相當?shù)莫毩⑿?。胎盤還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素,,是一個重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類和魚類也以胎生方式繁殖后代,,胚胎生長出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊,、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合,以達到母子間物質(zhì)的交換,,這樣的結(jié)構(gòu)稱假胎盤,。絨毛膜是由滋養(yǎng)層和胚外中胚層的壁層構(gòu)成。胚泡植入子宮內(nèi)膜后,,在胚泡表面形成許多絨毛樣的突起,,以細胞滋養(yǎng)層為中軸,外裹合體滋養(yǎng)層,,稱初級干絨毛,。胚外中胚層長入初級干絨毛的中軸,使初級干絨毛變成了次級干絨毛,。當絨毛膜的胚外中胚層內(nèi)形成血管網(wǎng)和結(jié)締組織,,并與胚體內(nèi)的血管相通時,次級干絨毛改稱三級干絨毛,。三級干絨毛末端的細胞滋養(yǎng)層細胞形成細胞滋養(yǎng)層殼,。隨著胚胎發(fā)育,叢密絨毛膜與基蛻膜共同構(gòu)成了胎盤,,而平滑絨毛膜則和包蛻膜一起逐漸與壁蛻膜融合,。
方法簡介:
實驗室分離的兔胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層采用-DNA酶聯(lián)合消化法結(jié)合密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質(zhì)量檢測:
實驗室分離的兔胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層經(jīng)Cytokeratin-7免疫熒光鑒定,,純度可達90%以上,且不含有HIV-1,、HBV,、HCV、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中),培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。
a)、對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b),、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
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收到細胞如何處理,?
1,、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請拍照,,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù))。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題,,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3,、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài)。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,,可正常傳代;若未超過80%,,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松,。
6、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉(zhuǎn)移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,,若細胞密度超過80%,,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),補加培養(yǎng)基至5ml,;若細胞密度未超過80%,,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作