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參考價(jià)	￥1-￥6200	/臺(tái)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期	現(xiàn)貨	規(guī)格	5×105cells/T25
貨號(hào)	YS-01X8441	主要用途	僅供科研研究實(shí)驗(yàn)

兔退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞公司正在出售的產(chǎn)品：小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞兔脊髓神經(jīng)元細(xì)胞 FRMD3蛋白抗體熒光素酶標(biāo)記的人單核細(xì)胞白血病;THP-1-Luc 鋅指蛋白136抗體 HEL 299 缺氧誘導(dǎo)蛋白HIG1抗體 MA-891 (小鼠乳腺癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞)

詳細(xì)介紹

兔退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞

兔退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞

商品屬性：

組織來(lái)源	產(chǎn)品規(guī)格	細(xì)胞形態(tài)	貨號(hào)
椎間盤(pán)	5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶	梭形,、多角形	YS-01X8441

細(xì)胞簡(jiǎn)介：

兔退行性椎間盤(pán)髓核分離退行性椎間盤(pán)組織；椎間盤(pán)是位于脊柱兩椎體之間,，分為中央部的髓核,，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周?chē)康睦w維環(huán),，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列,。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上,，下面骺環(huán)中間的骨面,。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來(lái)。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成,，位于髓核的四周,。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅(jiān)實(shí)的組織,，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負(fù)荷,。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性,，為椎間盤(pán)結(jié)構(gòu)的一部分,，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯(cuò)的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細(xì)胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì),。嬰幼兒時(shí)期的髓核含水量為80%-90%,，即使到了老年，其含水量也在70%上下,。髓核在出生時(shí)體積大而松散,，位于椎間盤(pán)的中央，至成年時(shí)位置移至椎間盤(pán)的中后部,；在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體,、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長(zhǎng),，髓核中的蛋白多糖解聚增多,，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件：

　　一,、靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)

　　1、細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,，以盡量除去消化液的毒性,；

　　2、細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,，至少為5×108細(xì)胞/L,；

　　3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),；

　　4,、胎牛血清濃度為10%-80%

　　5、應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),；

　　6,、在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,，漂?。?/p>

　　7,、待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,，應(yīng)將原代細(xì)胞換液；

　　8,、用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),，應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。

　　二、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)

　　1,、原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞,；

　　2、短期培養(yǎng),，可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行,；

　　3、細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),，進(jìn)行分瓶試驗(yàn),；

　　4、長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),，淋巴細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,，白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,，以利細(xì)胞生長(zhǎng),；

　　5、細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次,；

　　6,、細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行,。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔退行性椎間盤(pán)髓核采用膠原酶-混合消化法并結(jié)合軟骨細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái),，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的兔退行性椎間盤(pán)髓核經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定,，純度可達(dá)90%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細(xì)菌,、酵母和真菌等,。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS,、EGF,、Transferrin、Selenium Solution,、Penicillin,、Streptomycin等

換液頻率：每3-4天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：梭形、多角形

傳代特性：可傳3代左右

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%

兔退行性椎間盤(pán)髓核體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng),，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

兔退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞

細(xì)胞傳代及凍存：

細(xì)胞傳代步驟

細(xì)胞凍存步驟

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次,。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,，若細(xì)胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘,，棄去上清液,，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例,； 1．細(xì)胞凍存時(shí),，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,，細(xì)胞變圓脫落后,，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí),。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存,。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱,，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存,。記錄凍存管位置以便下次拿取,。

原代細(xì)胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種：

　　① 組織塊培養(yǎng)法

　　組織塊培養(yǎng)是常用、簡(jiǎn)便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團(tuán)塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,，瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層，以利于組織塊粘著于瓶壁,，使周邊細(xì)胞能沿瓶壁向外生長(zhǎng),。

　　② 消化培養(yǎng)法

　?、?懸浮細(xì)胞培養(yǎng)法

　　對(duì)于懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞,，如白血病細(xì)胞、淋巴細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、胸水和腹水中的癌細(xì)胞和免疫細(xì)胞無(wú)需消化，可采用低速離心分離,，直接培養(yǎng),，或經(jīng)淋巴細(xì)胞分層液分離后接種培養(yǎng)。

　?、芷鞴倥囵B(yǎng)

　　器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,，不進(jìn)行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng)，器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對(duì)完整性,，可用于重點(diǎn)觀察細(xì)胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,，以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用,。

兔退行性椎間盤(pán)髓核細(xì)胞