詳細介紹
商品屬性:
組織來源 | 產品規(guī)格 | 細胞形態(tài) | 貨號 |
外周血 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 | 圓形,、巨噬細胞樣 | YS-01X8442 |
細胞簡介:
兔外周血單核分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。單核細胞起源于骨髓中的造血干細胞,,并在骨髓中發(fā)育,。當它們從骨髓進入血液時仍然是尚未成熟的細胞。與其他血細胞比較,,單核細胞內含有更多的非特異性脂酶,,并且具有更強的吞噬作用。單核細胞在血液中停留2-3天后遷移到周圍組織中,,細胞體積繼續(xù)增大,,直徑可達50-80μm,細胞內所含的溶酶體顆粒和線粒體的數目也增多,,成為成熟的細胞,。固定在組織中的單核細胞稱為組織巨噬細胞,它們經常大量存在于淋巴結,、肺泡壁,、骨髓、肝和脾等器官,。激活了的單核細胞和組織巨噬細胞能生成并釋放多種細胞毒,、干擾素和白細胞介素,參與機體防衛(wèi)機制,,還產生一些能促進內皮細胞和平滑肌細胞生長的因子,。在炎癥周圍單核細胞能進行細胞分裂,并包圍異物,。
方法簡介:
實驗室分離的兔外周血單核采用密度梯度離心法結合差速貼壁法制備而來,,細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測:
實驗室分離的兔外周血單核經CD14免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,,且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS,、生長添加劑、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:半貼壁半懸浮
細胞形態(tài):圓形,、巨噬細胞樣
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔外周血單核體外培養(yǎng)周期有限,;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞傳代及凍存:
細胞傳代步驟 | 細胞凍存步驟 |
如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng),。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化,。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,,在1000RPM條件下離心4分鐘,,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,。 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例,; 1.細胞凍存時,,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,,細胞變圓脫落后,,加入2ml培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數板計數,。 2.1000RPM離心5分鐘去掉上清,。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%,。加入DMSO后迅速混勻,,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識,。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存,。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存,。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
原代細胞的培養(yǎng)方法一般有以下4種:
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用,、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法,。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,,以利于組織塊粘著于瓶壁,,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長,。
?、?消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,,如白血病細胞,、淋巴細胞、骨髓細胞,、胸水和腹水中的癌細胞和免疫細胞無需消化,,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),,或經淋巴細胞分層液分離后接種培養(yǎng),。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),,器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯系,、排列情況和相互影響,,以及局部環(huán)境的生物調節(jié)作用,。
公司正在出售的產品:
兔子髓0脂堿性蛋白(MBP)ELISAKit ELISA
兔子前列腺素E2(PGE2)ELISAKit ELISA
兔子前列腺素E1(PGE1)ELISAKit ELISA
兔子皮質/上腺(CO)ELISAKit ELISA
同源盒蛋白GSC抗體
COX4NB蛋白抗體
TNFRSF14重組小鼠 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG 0.5mgCamk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗原
CYB5R1重組人 CYB5R1 蛋白 Protein
GALK1 Protein Human 重組人 GALK1 / Galactokin僀?僀
Camk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG 0.5mgCamk1g(Calcium/calmodulin dependent protein kinase IG) 鈣/鈣調蛋白依賴蛋白激酶IG抗原
GALK1 Protein Human 重組人 GALK1 / Galactokinase / Galactose kinase 蛋白 (His & GST 標簽)
TNFRSF14重組小鼠 HVEM / TNFRSF14 蛋白 (His & Fc 標簽) Protein
SIRPA Protein Rat 重組大鼠 SIRP alpha / CD172a 蛋白
CYB5R1重組人 CYB5R1 蛋白 Protein
小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)ELISA pcr檢測試劑盒
Human homocysteic acid (Hcy) ELISA Kit 人同型半胱(Hcy)試劑盒
Humanapoptosissignalregulatingkinase1,ASK-1ELISAKit 人凋亡信號調節(jié)激酶I(ASK-1)pcr檢測試劑盒分裝
HumanBullousPemphigoid,BP試劑盒人大皰性類天皰瘡抗體(BP)試劑盒規(guī)格:96T/48T
植物組織葉綠體DNA萃取試劑盒10/20次
HumansolubleTumorNecrosisFactorαreceptor,sTNFαRELISAKit人可溶性壞死因子α受體(sTNFαR)試劑盒規(guī)格:96T/48T
兔外周血單核細胞大鼠纖調蛋白(FMOD)試劑盒 ,,英文名: FMOD ELISA Kit
Mouse chorionic gonadoopin beta (-CG beta) ELISA Kit 小鼠絨毛膜β(β-CG)試劑盒
Mouseiestinalfattyacidbindingprotein,iFABPELISAKit 小鼠腸脂肪酸結合蛋白(iFABP)pcr檢測試劑盒分裝
CLIAKitforHTLV-I(Huma-lymphoopicvirusI)ELISAKit人類嗜T淋巴細胞Ⅰ型病毒
細胞HSV1(HERPESSIMPLX1)病毒定性試劑盒20次
ELISAKitBTA大鼠膀胱腫瘤抗原
原代細胞的培養(yǎng)條件:
一,、靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
1、細胞要通過充分漂洗,,以盡量除去消化液的毒性,;
2、細胞接種時濃度要稍大一些,,至少為5×108細胞/L,;
3、培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng),;
4,、 胎牛血清濃度為10%-80%
5、應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng),;
6,、在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,,漂?。?/p>
7,、待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀,,應將原代細胞換液;
8,、用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養(yǎng)1周時,,應將細胞懸液經低速離心后換液。
二,、懸浮細胞培養(yǎng)
1,、原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞;
2,、短期培養(yǎng),,可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行;
3,、細胞濃度可在5-8×109/L范圍內,,進行分瓶試驗;
4,、長期培養(yǎng)時,,淋巴細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長,;
5,、細胞換液一般每隔3天需半量換液一次;
6,、細胞傳代一般待細胞增殖加快,、細胞密度較高時才能進行