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本網(wǎng)站銷售的化學產(chǎn)品僅供科學研究或工業(yè)應用,，不直接用于食品,、藥品,、臨床或動物的診斷或治療！
產(chǎn)品名稱：兔外周血樹突狀細胞 (成熟DC細胞)
組織來源：外周血
產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：半貼壁半懸浮
細胞形態(tài)：圓形,，樹突狀
傳代特性：屬于高度分化細胞；屬于不增殖細胞群
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣,，95%,；CO2，5%
兔外周血樹突狀(成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限,；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介：
兔外周血DC分離自外周血,，由外周血單核細胞誘導而成的,；外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,，再在從血液中提取分離得到造血干細胞,，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF,、IL4的作用下形成葡萄串樣集落，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多,，亦可見少量短刺狀突，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強的遷移能力,，伴隨有部分未誘導成的單核細胞，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經(jīng)TNFα,、LPS等誘導而成，多數(shù)呈懸浮生長,， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起（高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ）,，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物（MHC）以及CD80,、CD86等共刺激分子,，進而激活T淋巴細胞，誘導免疫應答,，處于啟動,、調控、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié),；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化、增殖產(chǎn)生免疫應答,，不能激活T細胞的第二信號,，可導致T細胞無能，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受,。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低,，一般在30%以下,。
方法簡介：
實驗室分離的兔外周血成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來,，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。
質量檢測：
實驗室分離的兔外周血樹突狀(成熟DC細胞)經(jīng)CD86免疫熒光鑒定、細胞形態(tài)等綜合鑒定,，純度可達80%以上,，且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟：
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻,。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度,。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng),。
a）,、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清,，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中,，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落,，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液,，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b）,、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞,，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式,，棄半數(shù)培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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HRAS Protein Human 重組人 HRAS / GTPase Hras 蛋白
ACP5重組小鼠 ACP5 / TRAP 蛋白 Protein
PROM1 Protein Rat 重組大鼠 CD133 / PROM1 / Prominin 1 蛋白 (Fc 標簽)
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收到細胞如何處理？
1,、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象,。若有，請拍照，并及時與技術支持聯(lián)系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,。
2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
3,、仔細閱讀細胞說明書,，了解細胞相關信息，如貼壁特性（貼壁/懸?。?、細胞形態(tài)、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例,、所需細胞因子、傳代比例,、換液頻率等,。
4、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶,，鏡檢、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)）,；建議細胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。
5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。
6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內,，1200rpm離心5min，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸。鏡檢時,，若細胞密度超過80%,，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%,，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng)，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作
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