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產品名稱：兔外周血樹突狀細胞 (未成熟DC細胞)

組織來源：外周血

產品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS,、生長添加劑,、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長特性：半貼壁半懸浮

細胞形態(tài)：圓形,、梭形、多角形,，形態(tài)多樣

傳代特性：屬于高度分化細胞,；屬于不增殖細胞群

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%,；CO2,，5%

兔外周血樹突狀(未成熟DC細胞)體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。

細胞簡介：

兔外周血DC分離自外周血，由外周血單核細胞誘導而成的,；外周血是除骨髓之外的血液,，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞,，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。樹突狀細胞分為成熟樹突狀細胞和未成熟樹突狀細胞,，典型的未成熟樹突狀細胞呈半貼壁生長,，在GM-CSF、IL4的作用下形成葡萄串樣集落,，細胞大而形態(tài)不規(guī)則,，表面皺褶多，亦可見少量短刺狀突,，胞內細胞器豐富并可見吞噬泡,，具有較強的遷移能力，伴隨有部分未誘導成的單核細胞,，貼壁形態(tài)多樣,。而成熟的樹突狀細胞由未成熟DC進一步經TNFα,、LPS等誘導而成，多數呈懸浮生長,， 細胞呈圓形,，細胞體積進一步增大，表面大量粗細不等的樹枝樣突起（高倍鏡或者電鏡下可觀察到 ）,，伴隨少量貼壁未成熟細胞或者單核細胞,。未成熟DC細胞長時間培養(yǎng)也可能導致自發(fā)分化成熟。DC細胞尚無特異性細胞表面分子標志,，主要通過形態(tài)學,、組合性細胞表面標志、在混合淋巴細胞反應中能激活初始T細胞等特征進行鑒定,。其中成熟樹突狀細胞表面高表達主要組織相容性復合物（MHC）以及CD80,、CD86等共刺激分子，進而激活T淋巴細胞,，誘導免疫應答，處于啟動,、調控,、并維持免疫應答的中心環(huán)節(jié)；未成熟樹突狀細胞具有很強的抗原攝取加工能力,，但由于缺乏多種共刺激分子不能使初始T細胞活化,、增殖產生免疫應答，不能激活T細胞的第二信號,，可導致T細胞無能,，從而誘導免疫低反應或抗原免疫特異性耐受。未成熟樹突狀細胞表面CD80,、CD86,、MHC-Ⅱ類分子等共刺激分子表達較低，一般在30%以下,。

方法簡介：

實驗室分離的兔外周血未成熟DC采用密度梯度離心法分離外周血單個核細胞,、培養(yǎng)過程添加細胞因子誘導而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶,。

質量檢測：

實驗室分離的兔外周血樹突狀(未成熟DC細胞)經CD86免疫熒光鑒定,、細胞形態(tài)等綜合鑒定，純度可達80%以上,，且不含有HIV-1,、HBV、HCV,、支原體,、細菌,、酵母和真菌等。

培養(yǎng)步驟：

一,、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,，棄去上清液,，補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中）,，培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。

二,、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%,，即可進行傳代培養(yǎng)。

a）,、對于貼壁細胞,，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺,，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出,，在1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,。

4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。

b）,、對于懸浮細胞,，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘,，棄上清液,，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中,。

方法二：可選擇半數換液方式,，棄半數培養(yǎng)基后,，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。

收到細胞如何處理,？

1、首先,，觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象,。若有,，請拍照，并及時與技術支持聯系（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）,。

2,、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落；先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,，將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)2-4小時,，以便穩(wěn)定細胞狀態(tài)。

3,、仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息,，如貼壁特性（貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。

4,、靜置完成后,，取出細胞培養(yǎng)瓶，鏡檢,、拍照,，記錄細胞狀態(tài)（所拍照片將作為后續(xù)服務依據）；建議細胞傳代培養(yǎng)后,，定期拍照,、記錄細胞生長狀態(tài),。

5、貼壁細胞：若細胞生長密度超過80%,，可正常傳代,；若未超過80%，移除細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基,，預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作，瓶蓋可稍微擰松,。

6,、懸浮細胞：將細胞培養(yǎng)瓶內液體全部轉移至50ml無菌離心管內，1200rpm離心5min,，離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,，管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打、重懸,。鏡檢時,，若細胞密度超過80%，可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內培養(yǎng),，補加培養(yǎng)基至5ml,；若細胞密度未超過80%，將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),，直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作

公司正在出售的產品：

兔乙酰(ACh)試劑盒

兔合成酶(NOS)試劑盒

兔氧化低密度脂蛋白抗體(OLAb)試劑盒

兔血小板衍生生長因子(PDGF)試劑盒

γ-谷氨酰羧化酶抗體

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GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (Fc 標簽)

Caspase-1 (ICE; CASP-1;P45 0.5mgCaspase-1 (ICE; CASP-1;P45) 天冬-胱特異性蛋白酶家族(抗原)

GSTM2 Protein Human 重組人 GSTM2 / GST4 蛋白

CD1D重組小鼠 CD1D / R3G1 蛋白 Protein

GFRA1 Protein Rat 重組大鼠 GFRA1 / GFR alpha-1 蛋白 (Fc 標簽)

ENO2重組人 NSE / ENO2 / Enolase 2 蛋白 Protein

小鼠β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA pcr檢測試劑盒

Human vitamin D receptor (VD R) ELISA Kit 人受體(VD R)試劑盒

Humanai-zonapellucidaaibody,aZPELISAKit 人抗透明帶抗體(aZP)pcr檢測試劑盒分裝

Humancholesterol,CH試劑盒人(CH)試劑盒規(guī)格：96T/48T

紫外線處理DNA損傷彗星熒光試劑盒20次

HumansecretedphospholipaseA2,sPLA2ELISAKit人分泌型0脂酶A2(sPLA2)試劑盒規(guī)格：96T/48T

兔外周血樹突狀細胞 (未成熟DC細胞)大鼠顆粒酶A(GZMA)試劑盒 ,，英文名： GZMA ELISA Kit

Mouse apolipoprotein H (Apo-H) ELISA Kit 小鼠載脂蛋白H(Apo-H)試劑盒

RatPulmonarysurfatca-associatedproteinA,SP-AELISAKit 大鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)pcr檢測試劑盒分裝

CLIAKitforFSH促卵泡生成素

細胞環(huán)氧化酶(CYCLOOXYGENASE-1/2)總活性熒光定量試劑盒20次

RatplateletaibodiesIgG/M/A,PA-IgG/M/AELISAKit大鼠抗血小板抗體IgG/M/A(PA-IgG/M/A)試劑盒規(guī)格：96T/48T