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產(chǎn)品名稱:兔外周血淋巴細胞
組織來源:外周血
產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑,、Penicillin,、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:懸浮
細胞形態(tài):圓形
傳代特性:不增殖;不傳代
消化液:0.25%
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,,95%,;CO2,5%
兔外周血淋巴體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),,以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài),。
細胞簡介:
兔外周血淋巴分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念,。淋巴細胞(lymphocyte)是白細胞的一種,是體積小的白細胞,。其由淋巴器官產(chǎn)生,,主要存在于淋巴管中循環(huán)的淋巴液中,是機體免疫應答功能的重要細胞成分,,是淋巴系統(tǒng)幾乎全部免疫功能的主要執(zhí)行者,,是對抗外界感染和監(jiān)控體內(nèi)細胞變異的一線“士兵"。淋巴細胞是一類具有免疫識別功能的細胞系,,按其發(fā)生遷移,、表面分子和功能的不同,可分為T淋巴細胞(又名T細胞),、B淋巴細胞(又名B細胞)和自然殺傷(NK)細胞,。T細胞和B細胞都是抗原特異性淋巴細胞,它們的初來源是相同的,,都來自造血組織,。T淋巴細胞隨血循環(huán)到胸腺,在胸腺激素等的作用下成熟,,而B細胞在骨髓中分化成熟,。當受抗原刺激后,T淋巴細胞即轉化為淋巴母細胞,,再分化為致敏T淋巴細胞,,參與細胞免疫,其免疫功能主要是抗胞內(nèi)感染,、瘤細胞與異體細胞等,;而B淋巴細胞是先轉化為漿母細胞,再分化為漿細胞,,產(chǎn)生并分泌免疫球蛋白(抗體),,參與體液免疫,其功能是產(chǎn)生抗體,,提呈抗原,,以及分泌細胞內(nèi)因子參與免疫調(diào)節(jié),;NK細胞不依賴抗原刺激而自發(fā)地發(fā)揮細胞毒效應,具有殺傷靶細胞的作用,。
方法簡介:
實驗室分離的兔外周血淋巴采用取外周血,、通過密度梯度離心法制備而來,細胞總量約為1×106cells/瓶,。
質量檢測:
實驗室分離的兔外周血淋巴經(jīng)過檢測,,且不含有HIV-1、HBV,、HCV,、支原體、細菌,、酵母和真菌等,。
培養(yǎng)步驟:
一、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻,。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,,補加4-6mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),,培養(yǎng)過夜,。第二天換液并檢查細胞密度。
二,、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,,即可進行傳代培養(yǎng)。
a),、對于貼壁細胞,,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣,、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次,。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的培養(yǎng)基終止消化,。
3.輕輕吹打細胞,脫落后吸出,,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,,棄去上清液,,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,,將細胞懸液按1:2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中,。
b)、對于懸浮細胞,,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,,1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄上清液,,補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻,,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二:可選擇半數(shù)換液方式,,棄半數(shù)培養(yǎng)基后,,將剩余細胞懸起,將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中,。
公司正在出售的產(chǎn)品:
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收到細胞如何處理,?
1,、首先,觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好,,培養(yǎng)液是否有漏液,、渾濁等現(xiàn)象。若有,,請拍照,,并及時與技術支持聯(lián)系(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)),。
2、用75%酒精擦拭細胞培養(yǎng)瓶表面,,顯微鏡下觀察細胞狀態(tài),。因運輸問題,部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落,;先不要打開培養(yǎng)瓶蓋,,將細胞置于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)2-4小時,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài),。
3,、仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,,如貼壁特性(貼壁/懸?。⒓毎螒B(tài),、所用基礎培養(yǎng)基,、血清比例、所需細胞因子,、傳代比例,、換液頻率等。
4,、靜置完成后,,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢,、拍照,記錄細胞狀態(tài)(所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù)),;建議細胞傳代培養(yǎng)后,,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài),。
5,、貼壁細胞:若細胞生長密度超過80%,可正常傳代,;若未超過80%,,移除細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng)基,預留5ml左右繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右再進行傳代操作,,瓶蓋可稍微擰松。
6,、懸浮細胞:將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)液體全部轉移至50ml無菌離心管內(nèi),,1200rpm離心5min,,離心后上清培養(yǎng)基可收集備用,管底細胞沉淀加入5ml培養(yǎng)基吹打,、重懸,。鏡檢時,若細胞密度超過80%,,可將細胞懸液分至2個細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)培養(yǎng),,補加培養(yǎng)基至5ml;若細胞密度未超過80%,,將細胞懸液移至原瓶繼續(xù)培養(yǎng),,直至細胞密度達80%左右時再進行傳代操作